4.17
在Maxam-Gilbert(化学裂解法)中,首先将模板DNA变性,并在5'端用磷-32进行放射性标记。
测序反应在四个不同的反应管中进行,每个反应管中含有四种不同的化学物质,这些化学物质能够修饰DNA中的不同核苷酸。
例如,甲酸仅攻击嘌呤类碱基,即腺嘌呤或鸟嘌呤,而肼仅攻击嘧啶类碱基——胞嘧啶或胸腺嘧啶。类似地,二甲基硫酸酯等化学试剂仅攻击单个核苷酸。
然后使用哌啶在修饰的碱基处切断DNA,产生不同长度的放射性标记DNA片段。
随后将四个反应在凝胶上平行电泳,并通过放射自显影进行可视化。通过从下至上读取放射自显影图像,即可 decipher 模板DNA的序列。
版权所有 © 2026 MyJoVE Corporation。保留所有权利。