32.6
亚细胞分级分离用于从细胞裂解液中获得不同细胞器的纯净组分。
两种常用方法 用于亚细胞组分分离的 差速离心和密度梯度离心
差速离心法通过依次递增的离心速度进行连续离心,以实现基于大小的细胞器分离。
首先,以约400至600 × g的低速离心样品,使细胞核和细胞碎片等较大结构沉淀。
然后,将上清液以10,000至20,000 × g的高速离心,使线粒体、溶酶体和过氧化物酶体等细胞器沉淀。
在超过 80,000 × g 的转速下进行进一步离心,可分离微粒体、膜组分甚至核糖体。
然而,差速离心法无法分离大小或密度非常接近的细胞器,例如线粒体与过氧化物酶体。
在这种情况下,密度梯度离心是一种更敏感的方法,是一种有价值的工具。
该方法 利用化学物质建立的密度梯度
例如蔗糖或甘油,以根据大小、形状或密度在单个离心管中将细胞器分离成不同的层。
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