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柱色谱法的原理
32.8
柱层析是一种生化技术,根据化合物的物理和化学性质对其进行分离。
它包含两个主要组成部分——固体固定相(即基质)和液体流动相(即溶剂)。
将样品(如蛋白质混合物)加载到装有基质的色谱柱中,然后利用溶剂使样品流经色谱柱。
在层析柱内部,基质作为分子筛,根据蛋白质的大小或与基质的相互作用对其进行过滤。较大的蛋白质通常比较小的蛋白质迁移得更快,从而实现基于分子大小的分离。
此外,样品中的蛋白质可能与基质发生相互作用。弱相互作用使蛋白质快速通过,而强相互作用则将蛋白质保留在柱内。
溶剂pH值或离子强度的逐步变化会改变蛋白质与基质间的相互作用,从而将蛋白质洗脱到不同的组分中。
色谱技术最早由俄罗斯植物学家 Michael S. Tswett 于 1901 年发明,用于利用有机溶剂分离植物色素。此外,1941 年,Archer John Porter Martin 和 R. L. M. Synge 通过将硅胶填充到柱中改进了该技术。然后使用氯仿和水的混合物作为流动相在填充柱…