32.11
研究人员可以利用已知的蛋白质序列(也称为标签)对目标蛋白质进行标记,以方便其纯化和检测。
为了标记一个蛋白质,首先将其核苷酸序列插入含有融合标签的表达载体中。
随后将该载体导入宿主细胞,以表达重组蛋白或融合蛋白。
根据预期的下游应用,可以使用多种类型的融合标签。
当缺乏针对某种蛋白质的特异性抗体时,可以利用表位标签来研究或检测该蛋白质。当目标蛋白被标记上已知的表位标签(如c-Myc肽段)后,即可使用市售的抗c-Myc抗体对其进行便捷的检测或纯化。
含有2到10个组氨酸残基的组氨酸标签也可与蛋白质融合。带有多聚组氨酸标签的蛋白质可通过含有二价镍离子或钴离子的金属离子亲和层析柱进行纯化。
荧光标签(如绿色荧光蛋白或GFP)在光照下会发出荧光。因此,可以利用荧光显微镜在活细胞内观察带有GFP标签的蛋白质。
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