32.12
十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是一种基于分子量的技术,可根据蛋白质的大小分离蛋白质混合物。
此处,样品蛋白用 β-巯基乙醇和 SDS 处理。
β-巯基乙醇是一种还原剂,可断裂二硫键。
SDS 是一种带负电荷的去污剂,可结合蛋白质的疏水区域,使其解折叠和变性,并赋予蛋白质均匀的负电荷。
然后将样品上样至由交联丙烯酰胺单体构成的聚丙烯酰胺凝胶中。
上层浓缩胶由于丙烯酰胺浓度较低而具有较大的孔径。
施加电压后,蛋白质样品像硬币一样堆叠,同时进入下方的分离胶。
分离胶由于丙烯酰胺浓度较高而具有更小的孔径。它起到分子筛的作用,使较小的蛋白质迁移更快,从而根据蛋白质的大小进行分离。
这些分离的蛋白质条带通常使用考马斯亮蓝染色法进行显色。可通过参照标记蛋白质确定每条条带的分子量。
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