33.14
生物样本必须经过制备才能用于电子显微镜观察,以保护样本免受强电子束以及真空所产生低压的损伤。
样品制备始于化学固定和彻底脱水。化学固定剂(如戊二醛或甲醛)可交联蛋白质,而四氧化锇常用于固定膜脂质。
接下来,使用浓度逐渐增加的乙醇或丙酮对样品进行逐步脱水,以避免样品收缩。
进行透射电镜观察时,样品被包埋在硬质环氧树脂中。随后,超薄切片机将样品切成超薄的横截面,以便电子能够穿透。
这些切片使用醋酸铀等重金属进行染色。结合金属的分子呈现较深的色泽,从而为图像提供对比度。
对于扫描电镜观察,样品需通过临界点干燥法,使用液态二氧化碳进一步干燥。随后,样品表面溅射镀上一层薄的导电金属(如金),以防止样品受热损伤,并提高成像质量。