昆虫蛹壳去除：一种蛹期研究方法

摘要

来源：Fukutomi, Y. 等。果蝇 Drosophila guttifera 蛹期分期方法及翅色素沉积的测量。J. Vis. Exp. (2018)。

本文介绍了一种在保持内部蛹体完整的情况下去除昆虫蛹壳的技术，从而使其适用于进一步的研究。示例实验方案以Drosophila guttifera为例展示了该操作流程；然而，该技术同样适用于其他Drosophila物种。

方案

本实验方案节选自 Fukutomi 等人发表于《视觉化实验杂志》（J. Vis. Exp.，2018年）的文章《果蝇蛹期分期方法及斑翅果蝇（Drosophila guttifera）翅膀色素沉积的测量》。

1. 去除蛹壳

注意 果蝇（Drosophila）的蛹被一种称为蛹壳的结构所包裹。蝇类（Muscomorpha）昆虫在化蛹时不会蜕去其幼虫期的角质层；相反，在脱皮（apolysis）之后，角质层会硬化，并作为蛹的保护性外壳，即蛹壳。位于蛹壳内的蛹具有真正的蛹期角质层，该角质层非常柔软且脆弱。在P4(ii)期脱皮发生之前，上皮组织与蛹壳是紧密贴附的，因此在此阶段无损伤地去除蛹壳极为困难。在P5期之后去除蛹壳虽较为费力，但对形态学观察及蛹期阶段的界定具有重要意义。具体操作步骤如下。

1. 将一片双面胶带贴在一张纸巾上。
2. 将一只蛹腹面朝上放置在双面胶带上（图1A）。
3. 找到蛹壳前端与内部蛹体之间的缝隙。用镊子夹住并从此处开始移除蛹壳，暴露蛹头部的前端。
4. 将镊子尖端沿前后轴方向平行插入，然后上抬镊子尖端，局部撬破蛹壳。重复此操作，直至破裂延伸至蛹壳后部。确保蛹壳与蛹的腿部之间也形成间隙，并打破蛹壳腹侧，同时尽量减少对内部蛹体的损伤（图1B）。
5. 在尽可能将蛹壳破碎后，使用细小的画笔（#5/0）取出蛹体（图1C）。
6. 将蛹体置于已用ddH₂O润湿并放置于塑料培养皿（直径60 mm × 高度15 mm）中的滤纸上。应尽快拍照，因为暴露的蛹体较为脆弱且容易干燥。
   

结果

图1. 去除蛹壳的示意图。 （A）将蛹腹面朝上放置在一片双面胶带上。移除蛹壳的前端部分。（B）从腹面用镊子敲裂蛹壳。（C）敲裂蛹壳后，使用画笔取出蛹体。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Drosophila guttifera	加州大学圣地亚哥分校果蝇物种保种中心	15130-1971.10	Drosophila guttifera ，本文所用的一种果蝇物种
NICETACK 双面胶带	Nichiban	NW-15SF	双面胶带  ，用于去除蛹壳
Dumont #5 镊子	精细科学工具公司	11252-20	镊子 ，用于去除蛹壳
Van Gogh VISUAL 画笔	Talens Japan	GWVR-#5/0	画笔 ，用于去除蛹壳
体视显微镜	奥林巴斯	SZX16	体视显微镜 ，用于形态学观察
数码相机	奥林巴斯	DSE-330-A	数码相机 ，用于成像
Falcon 标准组织培养皿	Corning	353002	塑料培养皿（直径 60 mm × 高度 15 mm）