Drosophila 雄性附属腺解剖：一种分离次级细胞的方法

摘要

来源：Immarigeon, C., 等. 一种基于流式细胞分选的果蝇雄性附属腺次级细胞RNA分离方案. J. Vis. Exp. (2019).

本视频介绍了从雄性果蝇中解剖副腺的方法，并展示了一个将分离的腺体解离为单细胞悬液的示例。

方案

本方案节选自 Immarigeon 等一种基于流式细胞术的方案，用于从附属细胞中分离RNA 果蝇 雄性附属腺体， 视频实验杂志 (2019).

1. 溶液与材料准备

1. 配制以下溶液。
   1. 配制含血清培养基（SSM）：在Schneider's Drosophila 培养基中添加10%热灭活胎牛血清和1%青霉素-链霉素。
   2. 分装1×胰蛋白酶酶溶液（例如TrypLE Express酶），并于室温保存。
   3. 分装木瓜蛋白酶溶液［50 U/mL］（储存于-20 °C，仅解冻一次）。
   4. 配制1×磷酸盐缓冲液（PBS，室温储存）。
2. 准备多个经火焰拉圆的移液器吸头，用于附腺的物理解离。
   注意：操作附腺时应使用低吸附性吸头，因其容易粘附于未经处理的塑料表面。火焰拉圆处理可缩小吸头开口并使边缘更光滑，从而在肽酶消化后实现有效的组织解离，同时避免细胞膜剪切损伤。
   1. 用锋利刀片切下一支200 µL吸头，并轻轻在火焰上过火，使其尖端变圆，开口更宽且光滑，便于后续2.7步骤操作。
   2. 将多....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
用于解剖的双目显微镜
带光源的双目显微镜（用于GFP观察）
本生灯
1.5 mL塑料微量离心管	Eppendorf
精细解剖镊
胎牛血清	Gibco	10270-106	使用前需热灭活
解剖用玻璃培养皿
冰桶
P1000移液器	Gilson
P20移液器	Gilson
P200移液器	Gilson
木瓜蛋白酶（Papain）			50U/mL储备液
PBS缓冲液			自行配制
青霉素-链霉素溶液	Gibco	15070-063
Schneider’s 果蝇培养基	Gibco	21720-001
Tipone 1250 μL带刻度吸头	Starlab	S1161-1820
Tipone 200 μL斜面吸头	Starlab	S1161-1800
TrypLE Express酶	Gibco	12604013