黑腹果蝇 卵巢解剖：一种技术方法 离体 组织制备

摘要

来源：Parker, D. J., 等. 果蝇卵巢中线粒体结构与功能的研究. J. Vis. Exp. (2017)。

本视频介绍了Drosophila 卵巢的一般解剖结构，并展示了一种用于活体或固定成像的卵巢解剖方法。

方案

本方案节选自Parker 等研究线粒体结构与功能 果蝇 卵巢， 视频实验杂志 (2017).

1. 准备 果蝇 （所需工具如图所示） 图1A)

1. 对于所述的任何实验，收集羽化后 5 天内的 Drosophila（在室温或 25 °C 下培养），将它们放入含有 5 - 7 mL Drosophila 食物（参见材料表）的试管中，每管不超过 25 只果蝇；保持雌雄比例为 2:1。
2. 撒入少量颗粒状酵母以促进 Drosophila 产卵。在 2 - 4 天内进行实验操作。

2. 解剖 果蝇 卵巢（所需工具如图所示） 图1A)

1. 温热的昆虫解剖液（参见 材料表将温度升至室温（25 °C）。在八孔玻璃解剖培养皿中，向三个孔各加入 200 µL 培养基。
2. 麻醉 果蝇 与 CO₂ 通过将吹管的针头置于小瓶塞下方。将它们放置在果蝇操作垫上。在解剖显微镜下挑选出5只雌蝇，放入解剖皿的第一个孔中。每次操作一只 果蝇 进行活细胞显微成像时
3. 通过解剖显微镜的目镜观察，使用两对镊子将胸部与腹部切断分离。用镊子小心地将腹部转移至培养皿的第二个孔中。
4. 用一对镊子夹住腹部后端，用另一对镊子缓慢将卵巢（连同其他腹部内容物）推出。若此操作失败，可将镊子插入前端，小心去除腹部外骨骼，以释放卵巢。
5. 使用镊子夹住单个卵巢的不透明后端（即，含卵黄的晚期卵子）小心转移至培养皿的第三个孔中，用于解离处理以进行活体显微观察，或固定后进行免疫染色。
6. 用镊子夹住卵巢后端，同时用解剖针轻轻从每个卵巢的后端向前端扫动，仔细将卵巢周围的保护鞘剥离。
   注意： 为尽量减少解剖过程中的损伤，应弯曲针尖，并通过增加显微镜的放大倍数来放大视野，逐一观察每个卵巢。图1A解剖时应施加足够的力以撕开滤泡膜，但操作需谨慎，以保持卵巢管的完整性。

结果

图 1：实验方案与准备工作。 (A) 所述方法中使用的工具：A. 果蝇培养管；B. 昆虫解剖培养基；C. 多聚甲醛；D. 果蝇毛刷；E. 解剖皿；F. 盖玻片；G. 微量离心管；H. 玻底培养皿；I. 玻片；J. 1,000-µL 移液枪；K. 200-µL 移液枪；L. 2.5-µL 移液枪；M. 尖端弯曲的解剖针（尖端放大图）；N. 粗镊子；O. 细镊子。 (B) 所述方法的流程图示意图。 请点击此处查...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Grace's 培养基（昆虫解剖培养基）	Fisher Scientific	30611031-2
41 甲醛水溶液	Electronic Microscopy Sciences	50-259-99
多聚赖氨酸（PolyLysine）	MP Biomedicals	ICN15017625
果蝇小管	Fisher Scientific	AS-515
果蝇小管塞	Fisher Scientific	AS273
Jazzmix 果蝇饲料（Drosophila food）	Fisher Scientific	AS153
Azer Scientific EverMark Select 显微镜载玻片	Fisher Scientific	22-026-252
显微镜盖玻片	Fisher Scientific	12-542-B
Mat Tek Corp 玻底细胞培养小皿	Fisher Scientific	P35G-0-14-C
活性干酵母	Fisher Scientific	ICN10140001
Dumont #5 镊子	Fine Science Technologies	11251-20
Moria 镍镀针夹	Fine Science Technologies	26016-12
Minutien 固定针	Fine Science Technologies	26002-15
MYFP ( w[*]; P{w[+mC]=sqh-EYFP-Mito}3 )	Bloomington Stock Center	7194
果蝇操作垫	Fly stuff	59-118
吹管	Fly stuff	54-104
吹管针头	Flystuff	54-119
解剖显微镜	Carl Zeiss	Stemi 2000