Drosophila melanogaster 寿命实验方案：生成生存曲线以鉴定果蝇寿命差异

摘要

来源：Bovier, T. F. 等人 检测内分泌干扰的方法 黑腹果蝇. J. Vis. Exp. (2019).

科学家使用黑腹果蝇（Drosophila）寿命实验方案来测量不同实验条件对果蝇寿命的影响，并在此过程中生成生存曲线，以量化实验结果。本示例方案描述了该检测方法在研究不同浓度的内分泌干扰物化学物质（EDC）（如17-α-乙炔雌二醇（EE2））对寿命影响中的应用。

方案

本方案节选自 Bovier 等 检测内分泌干扰的方法 黑腹果蝇， J. Vis. Exp. (2019).

1. 食物制备

1. 用于果蝇品系保种及幼虫生长，使用含3%干酵母粉、10%蔗糖、9%预煮玉米粉、0.4%琼脂的玉米粉培养基，以下简称玉米粉培养基（CM）。
   1. 将30 g酵母加入100 mL自来水中，煮沸并持续沸腾15分钟。
   2. 另取900 mL自来水，充分混合90 g预煮玉米粉、100 g蔗糖和4 g琼脂。
   3. 将上述溶液煮沸，调低火力，持续搅拌并煮5分钟。
   4. 5分钟后，加入热的酵母溶液，继续小火加热15分钟。
   5. 关闭热源，使溶液冷却至约60 °C。
   6. 加入5 mL/L的10%对羟基苯甲酸甲酯乙醇溶液，充分混匀，静置10分钟。
      注意：需谨慎控制对羟基苯甲酸甲酯的用量，因其浓度过高可能对幼虫具有致死作用。
   7. 将培养基分装至小管或瓶子中：每支果蝇管（25 mm × 95 mm）分装8 mL，每支果蝇管（22 mm × 63 mm）分装3 mL，每瓶果蝇瓶（250 mL）分装60 mL。
   8. 用纱布覆盖管口，在室温（RT）下干燥24小时后储存。
   9. 通过调整....

结果

图1：寿命曲线。 左侧为一个代表性数据表，记录了在整个实验期间，处理组（培养基 + EDC [0.05 mM EE2]）和对照组（培养基 + 溶剂）果蝇每3天的死亡数量。各组的平均寿命通过MATRIX SUM.PRODUCT计算得出；与对照组相比，处理组的平均寿命缩短。右侧显示了雄性果蝇饲喂含EE2（0.05 mM）培养基或仅含乙醇（对照组）的典型生存曲线。处理组果蝇的存活曲线下降更为迅速，且出现较早的拐点。请点击此处查看此图的放大版本。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
17α-乙炔雌二醇	Sigma	E4876-1G
果蝇培养基用琼脂	BIOSIGMA	789148
玉米粉	CA' BIANCA
果蝇培养管	BIOSIGMA	789008	25 mm × 95 mm
果蝇培养管	BIOSIGMA	789009	29 mm × 95 mm
果蝇培养管	Kaltek	187	22 mm × 63 mm
乙醇	FLUKA	2860
玻璃瓶			250 mL 瓶
玻璃小瓶	Microtech	ST 10024	平底管 100 × 24
Instant Success 酵母	ESKA		粉末酵母
对羟基苯甲酸甲酯	SIGMA	H5501
带LED光源的体视显微镜	Leica		S4E
蔗糖	HIMEDIA	MB025
手持式搅拌机 Pimmy	Ariete		食物处理器