化学干燥法：扫描电子显微镜（SEM）生物样品制备

摘要

来源：Koon, M. A. 等。用于扫描电子显微镜（SEM）形态学分析的原核与真核生物化学干燥制备方法。J. Vis. Exp. (2019)。

扫描电子显微镜（SEM）是一种用于观察生物样品表面特征的有力工具。然而，样品的正确制备对于获得高质量图像至关重要。本视频重点介绍完整成年果蝇（Drosophila）进行SEM观察前的脱水和干燥步骤。

方案

本方案节选自 Koon et al.， 《利用化学干燥法为扫描电子显微镜（SEM）形态学分析制备原核与真核生物》， J. Vis. Exp. （2019年）。

1. 准备与固定

1. 准备 Drosophila melanogaster（果蝇）。
   1. 使用100%二氧化碳麻醉成年果蝇。将麻醉后的成年果蝇（约10至30只）放入一个小的塑料螺口小瓶或1.5 mL离心管中。
   2. 将麻醉后的果蝇浸入1 mL固定液（1.25%戊二醛，0.1 M磷酸缓冲液，pH 7.2）中，在4 °C下固定2小时（或过夜）。如果果蝇漂浮在固定液表面，可加入几滴2.5%聚乙二醇叔辛基苯基醚以降低固定液的表面张力，使组织完全浸没。用玻璃移液管移除固定液。

2. 清洗与脱水

1. 清洗并脱水 Drosophila melanogaster（果蝇）。
   1. 在1.5 mL微量离心管中，用1 mL 0.1 M磷酸缓冲液（pH 7.2）于室温下清洗固定后的样品三次，每次10分钟。使用玻璃移液管去除每次清洗液时，注意不要将果蝇一并吸出。
   2. 使用梯度乙醇系列对样品进行脱水处理，在微量离心管中每次加入1 ....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
503号银导电胶	Electron Microscopy Sciences	12686-15
铝制称量皿	Fisher Scientific	08-732-100
铝制样品台（12 mm）	Electron Microscopy Sciences	75210
铝制样品台（25 mm）	Electron Microscopy Sciences	75186
粘贴标签	Electron Microscopy Sciences	76760
导电碳粘贴标签	Electron Microscopy Sciences	77825
聚乙二醇叔辛基苯基醚（Triton X-100）	VWR	97062-208
Hitachi 3400N-II 扫描电子显微镜	Hitachi	https://www.hitachi-hightech.com/us/product_list/	该公司似乎已不再销售此型号