成年个体注射 果蝇 果蝇：化合物或标记物递送方法

摘要

来源：Nazario-Toole, A. E., Wu, L. P. 利用体内吞噬作用检测法评估果蝇Drosophila melanogaster的细胞免疫反应. J. Vis. Exp. (2019)。

本视频介绍了如何对成年活体果蝇进行注射，并提供了一个示例实验方案，其中将标记的颗粒和台盼蓝注入果蝇腹部，以检测吞噬作用。

方案

本方案节选自 Nazario-Toole 和 Wu， 评估果蝇的细胞免疫反应 黑腹果蝇，使用一个 体内 吞噬作用检测 J. Vis. Exp. (2019).

1. 准备用于注射的荧光素颗粒

1. 通过加入 990 µL 无菌 1x PBS 和 10 µL 50 mM 叠氮化钠，将 10 mg 商业可得的、用荧光素标记的灭活细菌颗粒（参见材料表）重悬至 10 mg/mL 的储存浓度。涡旋混匀。
   1. 分装为每份 8 µL 的单次使用量至 0.2 mL 离心管中，并置于避光盒内 4 °C 保存，以尽量减少光敏感性。
      注意：叠氮化钠防腐剂为可选，若将 10 mg/mL 储存液用 1 mL 无菌 1x PBS 配制后分装并储存于 -20 °C，则可省略叠氮化钠。
2. 通过混合 500 µL 注射器过滤的绿色食用色素与 9.5 mL 无菌 1x PBS，配制 10 mL 的 5% 食用色素溶液（溶于 1x PBS）。
3. 注射前洗涤颗粒以去除叠氮化钠。在 1.7 mL 离心管中混合 42 µL 无菌 1x PBS 与 8 µL 10 mg/mL 颗粒溶液。室温下以最大转速离心 2.5 分钟。
   ....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
5430-10 PicoNozzle 试剂盒	World Precision Instruments	5430-10	用于 1.0 mm 移液管的支架
大肠杆菌（K-12 菌株）BioParticles，荧光素偶联物	Invitrogen	E2861	经灭活的大肠杆菌，标记有 FITC（荧光素）。用于检测吞噬细胞对革兰氏阴性菌的识别和摄取。（~494/~518 nm）
玻璃微电极拉制仪	David Kopf Instruments	Model 725
气动 PicoPump PV820	World Precision Instruments	SYS-PV820	World Precision Instruments 气动 PicoPump PV820 利用差压法在注射间隙将液体保持在玻璃针头内。 用户手动控制短时气体压力脉冲以排出液体，从而实现亚纳升级别体积的递送。– 递送液体的量主要取决于两个变量：–玻璃针头开口的大小以及施加注射压力的时间。 将仪器设置为 100 ms 的“定时”模式"TIMED"。
薄壁玻璃毛细管	World Precision Instruments	TW100F-3	用于注射的针管。外径 = 1.0 mm
台盼蓝溶液（0.4%）	Sigma	T8154	用于淬灭荧光素、Alexa Fluor 或德克萨斯红标记颗粒的细胞外荧光。