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方法文章

Drosophila 中食物摄取与偏好检测的毛细管饲喂(CAFE)实验方法

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2023年4月30日

本文内容

摘要

来源:Diegelmann, S. 等。毛细管饲喂法测定黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)的食物摄入量J. Vis. Exp. (2017)。

本视频介绍了毛细管饲喂(CApillary FEeder,简称CAFE)实验,这是一种用于测量无束缚果蝇摄食量和食物偏好的行为学方法。本视频展示的实验方案重点在于如何使用充满液体的毛细管递送食物并追踪其摄食量,同时最大限度地减少蒸发。

方案

本实验方案节选自 Diegelmann 等人发表的《毛细管饲喂法测定黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)的食物摄入量》,《视觉实验杂志》(J. Vis. Exp.,2017年)。

1. 毛细管饲喂实验的组装与操作

  1. 若无需禁食,可通过轻敲或吹管法将实验果蝇转移至检测装置中。确保设置三个不含果蝇的对照管,用于量化蒸发量。
  2. 小心取下堵住其中一个外侧开口的移液器吸头(2–20 µL 体积),先将装有溶液的玻璃毛细管底部插入该开口。随后将移液器吸头重新放置在毛细管旁,以固定毛细管。若需测试多种食物溶液,请相应重复此操作步骤。
  3. 将毛细管末端置于所有小瓶内相同高度处,以避免因食物来源位置高低不同而产生偏差(距瓶盖3-4 cm);同时保持与滤纸的距离,防止毛细管意外接触滤纸或因食物来源黏度不同而导致泄漏。
  4. 用记号笔标记有色液体的上端(标记开始为确保能够区分不同的毛细管,需使用颜色或条纹编码对它们进行单独标记。
  5. 将多个制备好的CAFE实验装置放入带有网格衬垫的塑料盒中,并转移该盒子(图2A) 置于实验室条件下或置于温度、光照和湿度可控的气候室中(参数:25 °C、60% 相对湿度、12 h 光照/12 h 黑暗循环)进行....

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结果

果蝇行为实验;CO2麻醉装置;毛细管测量;昆虫研究;游标卡尺使用。
图1:Drosophila melanogaster 毛细管摄食实验(CApillary FEeder Assay)。 A) 果蝇摄食实验装置。离心管底部放置湿润的滤纸以提供水分。实验期间提供四根毛细管(相对的毛细管中分别装有红色和蓝色食物)。注意:毛细管通过第二个移液枪头固定位置,未使用的孔位则用移液枪头封闭。瓶盖中央的泡沫塞可实现气体交换。B) 瓶盖的详细结构。未使用的锥形孔中插入被剪断的移液枪头(2–20 µL,红色边框),再将另一移液枪头插入已剪断的枪头中以封闭孔洞。剪断的移液枪头用于控制微毛细管的位置,未剪断的枪头则用于牢固固定毛细管。C) 一只D........

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
小瓶(繁殖用)Greiner Bio-One960177<a target="_blank" href="http://www.greinerbioone.com">www.greinerbioone.com</a>
小瓶(CAFE实验用)Greiner Bio-One217101<a target="_blank" href="http://www.greinerbioone.com">www.greinerbioone.com</a>
CAFE实验盖Workshop&ndash;&ndash;
塑料盒,矮边Plastime353<a target="_blank" href="http://www.plastime.it">www.plastime.it</a>
塑料盒盖Workshop&ndash;&ndash;
毛细管BLAUBRANDREF 7087 07<a target="_blank" href="http://www.brand.de">www.brand.de</a>
移液器吸头Greiner Bio-One771290<a target="_blank" href="http://www.greinerbioone.com">www.greinerbioone.com</a>
滤纸圆片Whatman10 311 804<a target="_blank" href="http://www.sigmaaldrich.com">www.sigmaaldrich.com</a>
D(+)-蔗糖AppliChem57-50-1<a target="_blank" href="http://www.applichem.com">www.applichem.com</a>
无水乙醇VWR Chemicals20,821,330<a target="_blank" href="http://www.vwr.com">www.vwr.com</a>
食用色素(红色,E124)Backfun10027<a target="_blank" href="http://www.backfun.de">www.backfun.de</a>
食用色素(蓝色,E133)Backfun10030<a target="_blank" href="http://www.backfun.de">www.backfun.de</a>
皂液(CVK 8)CVH103220<a target="_blank" href="http://www.cvh.de">www.cvh.de</a>
数字卡尺GARANT412,616<a target="_blank" href="http://www.hoffmann-group.com">www.hoffmann-group.com</a>
小瓶(繁殖用)高度 9.8 cm,直径 4.8 cm
小瓶(CAFE实验用)高度 8 cm,直径 3.3 cm
CAFE实验盖由大学车间定制生产,附技术图纸<br/> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/55024/Diegelmann-Cafe-Lid-technical-drawing.pdf" target="_blank">请点击此处下载该文件</a>
塑料盒,矮边定制了一个用于8×10个瓶位的塑料网格内衬
塑料盒盖尺寸(37 × 29 × 18 cm)
毛细管DIN ISO 7550 标准,IVD 指南 98/79 EG,端面抛光
移液器吸头外圈移液器吸头根据盖子形状进行裁剪
滤纸圆片折叠后适用于所用小瓶的直径为 45 mm
D(+)-蔗糖无害
无水乙醇高度易燃液体和蒸气
食用色素(红色,E124)未说明
食用色素(蓝色,E133)未说明
皂液(CVK 8)无味皂液
数字卡尺
标准果蝇培养基(配制 20 L)
琼脂160 g
啤酒酵母299.33 g
玉米粉1,200 g
糖蜜1.6 L
丙酸57.3 mL
尼泊金酯 30%160 mL

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