幼虫淋巴腺解剖：分离 Drosophila 血细胞生成器官

摘要

来源：Reimels, T. A. 和 Pfleger, C. M. 检测果蝇幼虫淋巴腺及血细胞的方法. J. Vis. Exp. (2016)。

本视频介绍了果蝇幼虫中造血的主要部位——Drosophila 淋巴腺，并演示了一种用于免疫组织化学和荧光成像的器官解剖与制片示例方案。

方案

本方案节选自 Reimels 和 Pfleger 的《检测淋巴腺与血细胞的方法》 黑腹果蝇 幼虫， 视频实验杂志 (2016).

1. 幼虫淋巴腺免疫组织化学

注意： 淋巴腺位于幼虫前端约三分之一长度处，背侧，略低于脑部。（见图1B中的箭头。）淋巴腺位于背血管两侧，最易连同口钩或脑部一起解剖下来。野生型三龄幼虫的淋巴腺结构非常小，主叶长度约为100 - 200 µm。（见图2A。）

1. 为了在本实验中获得发育阶段大致相同的幼虫，需限制卵的收集时间，仅让雌虫产卵2至6小时。
2. 淋巴腺解剖
   1. 每种实验条件下，加入 1 ml 1× PBS（表124 孔板的一个孔中。
   2. 加入1滴0.1% PBST（表1使用一次性移液管向每个孔中加入）
      注意： 加入去垢剂（如 Tween 20）以降低表面张力，使组织沉降至孔板底部。
   ....

结果

图1：体内晶体细胞黑色素化。 A) 加热前将幼虫单独放入PCR管中。红色箭头指示未位于管底的幼虫。 B) 加热后典型的晶体细胞黑色素化模式，有时可显示出淋巴腺（箭头；显示背侧，前端在左侧）。比例尺为1 mm。 请点击此处查看该图的放大版本。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
PBS 片剂	MP Biomedicals	2810305
解剖皿	Corning	7220-85
微量离心管	Denville	C2170
由 Sylgard 184 试剂盒制备的硅胶解剖垫	Krayden（通过 Fisher 销售）	NC9644388（Fisher 目录编号）	按照生产商说明，将 Sylgard 弹性体试剂盒组分混合后在培养皿中制备而成。
体视显微镜	Morrell Instruments（Nikon 分销商）	mna42000, mma36300	Nikon 型号 SMZ1000 和 SMZ645
擦拭纸	VWR	82003-820
镊子	Electron Microscopy Sciences	72700-DZ
p200 移液器	Eppendorf	3120000054
甲醛	Fisher	BP531-500
吐温-20	Fisher	BP151-500
Tween 20	Fisher	BP337-500
牛血清白蛋白	Rocky Mountain Biologicals	BSA-BSH-01K
正常山羊血清	Sigma	G9023-10ML
正常驴血清	Sigma	D9663-10ML
200 证明乙醇	VWR	V1001
没食子酸丙酯	MP Biomedicals	102747
甘油	VWR	EM-4750
DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚）	Fisher	62248
显微镜盖玻片，18 mm 圆形	Fisher	12-545-100
玻璃显微镜载玻片	Fisher	22-034-980
24 孔板	Corning	351147
一次性移液管	Fisher	13-711-9AM
荧光显微镜	Zeiss		Axio Imager.Z1