Drosophila 成虫脑解剖：果蝇神经生物学中的一种方法

摘要

来源：Kelly, S. M. 等人 成年果蝇蘑菇体与光感受器神经元的解剖及免疫荧光染色 黑腹果蝇 大脑. J. Vis. Exp. (2017).

本视频介绍了如何解剖和分离成年 Drosophila 大脑——这一操作是可视化该器官所必需的步骤，因为大脑通常被外骨骼、眼睛和气管组织遮挡。示例方案详细展示了获得高质量样本的完整过程，这些样本可用于 Drosophila 神经生物学研究中的免疫染色和成像方法。

方案

本实验方案节选自 Kelly et al., 成年 Drosophila melanogaster 脑中蘑菇体与感光神经元的解剖及免疫荧光染色, J. Vis. Exp. (2017)。

1. 解剖工作站准备

1. 将体视显微镜及带有光纤蛇形管的光源放置在较大的实验台面上。为在解剖过程中保持手部动作稳定并减少手部"抖动"，显微镜周围必须留出充足的手部和手臂支撑空间。确保显微镜两侧各留有约8–10英寸的空间，显微镜底座与实验台边缘之间留有4–6英寸的距离。
2. 在玻璃制的9孔或3孔培养皿中，向其中2至3个孔各加入1.0 mL PTN缓冲液（0.1 M 磷酸钠缓冲液，pH 7.2，含0.1%非离子型表面活性剂；完整缓冲液组分见材料表），并将培养皿置于冰上，靠近解剖操作台。新解剖获得的脑组织将转移至此培养皿中，并在固定前进行储存。
   注意：若需进行活体成像，解剖缓冲液应使用1×磷酸盐缓冲液（PBS）或HL3缓冲液。若需检测细胞内蛋白定位，PBS也可作为解剖和固定步骤的替代缓冲液。固定后，应使用含0.1%或0.3%非离子型去垢剂的PTN缓冲液进行洗涤，以实现细胞膜的通透化处理。
   1. 若使用PBS进行....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
显微解剖镊子	Ted Pella	505-NM
聚二甲基硅氧烷（Sylgard）培养皿	Living Systems Instrumentation	DD-50-S-BLK	可从 amazon.com 购买
磷酸二氢钠缓冲液	Sigma	S3139
吐温-100（Triton X-100）	Sigma	X100-100ml
体视显微镜	Leica S6D 配 KL300 LED 光源
9孔板（点样板）	VWR	89090-482
35 mm 培养皿	Genesee Scientific	32-103
Sylgard	Fisher	50-366-794
吸水纸（Kimwipe）	Fisher	06-666
PTN 缓冲液			0.1 M NaPhosphate，pH 7.2，0.1% Triton-X-100；通常配制 0.5 L 的 0.1 M NaPhosphate 缓冲液，并根据需要每次分装 50 ml