来源：Koyle, M. L. 等。无菌和已知菌群条件下培养果蝇Drosophila melanogaster。J. Vis. Exp. (2016)。
Drosophila 胚胎被保护性的外膜所包围。为了接触胚胎，通常需要去除这些膜中最外层的卵壳膜（chorion）。本视频介绍了一种常用的使用次氯酸钠进行脱卵壳（dechorionation）的方法。示例实验方案展示了该操作流程，并采用了无菌操作技术，以满足无菌或已知菌群动物培养的需要。
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Drosophila 卵收集与去壳：一种去除卵最外层的方法
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2023年4月30日
本文内容
摘要
方案
本实验方案 摘自 Koyle 等人饲养果蝇 黑腹果蝇 在无菌和已知菌群条件下 J. Vis. Exp. (2016).
1. 准备产卵笼
- 通过微波加热100 ml水、10 g酿酒酵母、10 g葡萄糖和1 g琼脂来制备葡萄汁琼脂平板。在步骤1.1中煮沸3次，并加入10 g冷冻葡萄汁浓缩液，以提高琼脂平板上卵的可见度。
- 当琼脂冷却至55 °C时，将20 ml倒入100 mm培养皿中，静置使其凝固。
- 通过将1 g酿酒酵母与15 g水混合制成酵母糊，覆盖琼脂平板表面。将酵母糊倒在琼脂平板上，确保表面完全覆盖，然后倒去多余部分，留下一层薄薄的酵母残留物。若使用多个平板，可依次将酵母糊倒在多个平板上。
- 将琼脂平板转移至笼子底部。
注意：32盎司的熟食容器是丙烯酸果蝇笼的良好替代品。- 通过在容器顶部切一个孔，并用无毒胶水将透气网膜粘在孔上，为32盎司熟食容器制作盖子。如果胶水可溶于水，则应避免盖子接触水分。
- 将200–300只果蝇转移至容器中，并盖上盖子。用空的培养皿盖覆盖有网膜保护的孔，以防止琼脂表面水分蒸发；如需要，可在盖子内部放置一张湿润的纸巾。在25 °C下孵育果蝇过夜，持续16–20小时。
2. 收集卵
- 通过将尼龙网放入塑料衬套中，制备用于收集卵的筛子。
- 为获取带有卵的培养皿，将果蝇转移到空容器中以移出笼子。若次日需继续使用同一批果蝇，应立即将其转移至含有新鲜酵母化葡萄汁琼脂平板的新笼子中。同一批果蝇可连续使用3-5天。
- 用干净的画笔从琼脂表面移除死亡果蝇，注意避免破坏琼脂。
- 通过用蒸馏水冲洗琼脂平板、轻轻刷下卵粒，并将悬浮液倒入筛网上来收集卵。重复操作3-4次，直至几乎所有或大部分卵从琼脂平板上被移除。
3. 脱卵壳并转移至无菌培养基
- 使用70%乙醇喷洒生物安全柜内部（包括侧面）以进行准备。用实验纸巾擦拭底部，并用紫外光照射通风橱约15分钟以灭菌。将所有非生物用品（样品杯、毛刷、镊子、废液容器、400 ml无菌水和100 ml 0.6%次氯酸钠溶液）用乙醇喷洒后立即放入生物安全柜中，并用紫外光照射15分钟进行灭菌。
- 将带有卵的套管放入120 ml样品杯或其他无菌容器中，开始第一次次氯酸钠清洗。缓慢向套管中倒入约90 ml 0.6%次氯酸钠溶液，直至液面接近套管边缘。
- 清洗卵2.5分钟。定期使用镊子上下移动套管，使卵在次氯酸钠溶液中重新悬浮。
- 在生物安全柜内，将套管直接转移至第二个已预装90 ml漂白剂的样品杯中。
- 在生物安全柜内重复步骤3.3。第二次漂白处理结束时，卵应开始附着在套管壁上。
- 在生物安全柜内执行步骤3.7–3.8。
- 弃去漂白剂，并用无菌水清洗套管3次。每次清洗过程中，通过镊子移动套管多次重新悬浮卵。第三次清洗结束时，大多数卵应附着在套管壁上。
- 使用经乙醇灭菌的毛刷，将卵从套管壁转移至无菌培养基中。可逐个或分小批转移卵。每管接种30–50枚卵为宜。保持管盖松动，以允许氧气进入试管。
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材料
