果蝇鸡蛋收集和去绒毛膜:一种去除最外层鸡蛋层的方法

摘要

来源:Koyle， M. L. 等人 在轴生和生物条件下饲养果蝇黑腹果蝇。J. Vis. Exp.（2016 年）。

果蝇胚胎被保护性外膜包围。为了获得胚胎，通常会去除绒毛膜（最外层的膜）。本视频介绍了一种使用次氯酸钠的常用去绒毛膜化方法。示例协议演示了在采用 axenic 或 gnotobiotic 动物饲养所需的无菌技术时进行的程序。

方案

此协议摘自 Koyle 等人，在 Axenic 和 Gnotobiotic 条件下饲养果蝇黑腹果蝇，J. Vis. Exp.（2016 年）。

1. 准备产蛋笼

1. 用微波炉加热 100 毫升水、10 克啤酒酵母、10 克葡萄糖和 1 克琼脂制作葡萄汁琼脂平板。在步骤 1.1 中煮沸 3 次，加入 10 克冷冻浓缩葡萄汁，以增加琼脂板上鸡蛋的可见度。
2. 当琼脂冷却至 55 °C 时，将 20 ml 倒入 100 mm 培养皿中并使其凝固。
将
3. 1 g 啤酒酵母与 15 g 水混合，用酵母糊覆盖琼脂板的表面。将酵母糊倒在琼脂板上，确保表面被覆盖，然后倒掉多余的部分，留下薄薄的酵母残留物。如果使用多个板，则可以将浆料按顺序倒入多个板中。
4. 将琼脂平板转移到笼子底部。
   注意:一个 32 盎司的熟食容器是亚克力飞笼的良好替代品。
   通过在
   1. 顶部切一个孔并用无毒胶水在孔上粘上透气的网眼，为 32 盎司的熟食容器制作盖子。如果胶水是水溶性的，请防止水接触盖子。
5. 将 200-300 只果蝇转移到容器中，并盖上盖子。用空的培养皿盖住网眼保护孔，以防止从琼脂表面蒸发，如果需要，在盖子内添加湿纸巾。将果蝇在 25 °C 下孵育过夜 16-20 小时。

2. 收集鸡蛋

1. 将尼龙网放入塑料衬套中，准备收集鸡蛋的筛子。
2. 要取回装有鸡蛋的盘子，请转移到空容器中，将苍蝇从笼子中取出。如果第二天将使用相同的果蝇，请立即转移到装有新鲜发酵葡萄汁琼脂板的新笼子中。苍蝇可以连续使用 3-5 天
3. 用干净的画笔从琼脂中取出死苍蝇，注意不要弄碎琼脂。
4. 用蒸馏水冲洗琼脂板，轻轻刷洗琼脂表面的鸡蛋，然后将浆液倒在网眼上，以收集鸡蛋。重复 3-4 次，直到所有或大部分鸡蛋从琼脂板中取出。

3. 去绒毛膜蛋并转为无菌饮食

1. 用 70% 乙醇喷洒内部（包括侧面）来准备生物安全柜。用实验室纸巾擦拭底部，并用紫外线对罩子消毒 ~15 分钟。通过喷洒乙醇对所有非生物用品（标本杯、画笔、镊子、废液容器、400 ml 无菌水和 100 ml 0.6% 次氯酸钠）进行消毒，并立即放入生物安全柜中。用紫外线消毒 15 分钟。
2. 通过将装有鸡蛋的衬套放入 120 ml 样品杯或其他无菌容器中，开始 2 次次氯酸钠洗涤中的第一次。将 ~90 ml 0.6% 次氯酸钠溶液缓慢倒入衬套中，直到刚好低于边缘。
3. 冲洗鸡蛋 2.5 分钟。在次氯酸盐溶液中，使用镊子上下移动衬套，定期重新悬浮鸡蛋。
4. 将衬套直接转移到生物安全柜内的第二个标本杯中，该杯预先装满了 90 ml 漂白剂。
5. 在生物安全柜内重复步骤 3.3。在第二次漂白处理结束时，鸡蛋应开始粘附在衬套的侧面。
6. 在生物安全柜中执行步骤 3.7-3.8。
7. 丢弃漂白剂，用无菌水清洗衬套 3 次。在每次洗涤过程中，用镊子移动衬套，将鸡蛋重新悬浮数次。在第三次清洗结束时，大多数鸡蛋应连接到衬套的侧面。
8. 使用在乙醇中消毒的画笔，将鸡蛋从衬套侧面转移到无菌饮食中。单独或小批量转移鸡蛋。目标是每瓶 30-50 个鸡蛋。松开盖子，让氧气进入试管。

材料