绒毛膜和卵黄膜的机械去除：一种制备方法 黑腹果蝇 用于直接观察的卵母细胞

摘要

来源：Perkins, A. T., Bickel, S. E. 使用荧光技术 原位 利用杂交（FISH）监测早中期和中期I染色体臂的黏连状态 果蝇 卵母细胞. 视频实验杂志 (2017).

本视频介绍了一种机械去除经固定处理的成熟卵膜及卵黄膜的方法 果蝇 卵母细胞。本方案详细展示了获得适用于荧光成像的卵母细胞的操作步骤。 原位 杂交实验

方案

本方案节选自Perkins和Bickel的《使用荧光》 原位 通过荧光原位杂交（FISH）监测早中期和中期I染色体臂黏连状态 果蝇 卵母细胞， 视频实验杂志. (2017).

1. 去除卵膜和卵黄膜

注意：所需工具请参见图1。

1. 分离晚期卵母细胞
   1. 向浅解剖皿中加入 1 mL PBSBTx。使用带有经 BSA 包被的枪头的 P200 移液器，将固定后的卵巢（约 150 µL）转移至浅皿中。用经 BSA 包被的移液枪头将卵巢轻轻吹打，使成熟卵母细胞与未成熟卵母细胞分离。
   2. 当晚期卵母细胞充分分离后，将所有组织转移至一个500 µL微量离心管中。用拉制的巴斯德移液管吸除多余液体，保留约150–200 µL于管中。对剩余的基因型重复步骤1.1。
2. 准备滚压
   1. 用 200 µL PBSBTx 预润湿一个深孔培养皿，盖好后备用。取 3 张磨砂玻片，将第 3 张玻片放置一旁。轻轻将第 1 和第 2 张玻片的磨砂区域相互摩擦。用去离子水冲洗玻片以去除玻璃碎屑，并用一次....

结果

图1：细胞学工具。 实验方案中使用的工具：（1）一对镊子（#5 Dumont）；（2）钨针；（3）带盖深孔培养皿；（4）浅底玻璃解剖皿；（5）拉制的巴斯德移液管。请点击此处查看该图的放大版本。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
牛血清白蛋白（BSA）	Fisher Scientific	BP1600-100	配制10%储存液<br/> 分装后冷冻保存
10% Triton X-100	Thermo Scientific	28314	Surfact-Amps
PBSBTx			1X PBS，0.5% BSA，0.1% Triton X-100
镊子	Dumont		#5 INOX，Biologie
9" 一次性玻璃巴斯德吸管	Fisher	13-678-20C	高压灭菌以消毒
浅口玻璃解剖皿			定制
深孔培养皿（3孔）	Pyrex	7223-34
钨针			自制
磨砂玻璃载玻片，25 × 75 mm	VWR Scientific	48312-002
15 mL 圆底离心管	Various
500 &micro;L 微量离心管	Various
Kimwipes	Various		一次性擦拭纸