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飞普佩眼脑复合物的解剖：隔离视网膜组织的方法

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

资料来源：迪安杰利斯，M.W.，约翰逊，R.I. 解剖的 德罗索菲拉 普帕尔视网膜免疫化学，西方分析，和RNA隔离。 J. 维斯(2019).

此视频描述了如何解剖和隔离眼脑复合物从 德罗索菲拉 普帕。特色协议演示了产生高质量组织的程序，与免疫染色以及其他基因表达实验相容。

Protocol

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本协议摘自迪安杰利斯和约翰逊，免疫化学、西方分析和RNA隔离的德索菲拉·普帕尔视网膜解剖   ，J.Vis. Exp.（2019年）。

1. 组织准备

  1. 设置 德罗索菲拉 十字架（如格林斯潘，冷泉港实验室出版社，2004年）或培养特定的 果蝇 菌株，以获得所需的基因型的幼崽。为了确保大量幼崽巧出现，在营养丰富的食品介质或标准食品介质上建立这些重复的苍蝇培养物，并慷慨地补充酵母糊。
  2. 将 德罗索菲拉 文化保持在 25 °C。 对于使用 UAS-GAL4 系统的十字架 ，GMR-GAL4 是幼虫眼盘细胞在形态遗传沟渠和整个幼虫发育过程中表达的理想驱动因素。交叉 UAS-lacZ X GMR-GAL4 是理想的控制交叉，因为它驱动非内源性和惰性β-卡拉托西酶蛋白的表达。
  3. 使用用蒸馏水湿润的 6" 竹夹板尖，轻轻地将白色预便 （图 1B） 从健康养殖小瓶的侧面抬起 （图 1A），放入 1.5 mL 微中流管 （图

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Results

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图1：解剖的普佩的选择和文化。 （A） 游荡的第三只幼虫在恒星 （L3） 幼虫和幼虫沿着健康的 德罗索菲拉 文化的两侧定位。（B） 前脓液可以通过其半透明的白色来识别，因为保护性 pupal 外壳中尚未生成色素。前后和后部-腹腔轴的 pupa 以蓝色显示。潮湿的竹夹板用于从小瓶壁上拆开并采摘预花。（C） Pupae 被放置在 1.5 mL 微中流管内，这些管子的标签适当（基因型、收集日期和收集时间）和（D）在由空移液器尖端盒组装而成的加湿室内培养。湿度通过在盒子内放置一块潮湿的组织来保持。 请单击此处查看此图的更.......

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Materials

<表 fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"> List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments 竹夹板，6 英寸 泰德佩拉公司 116 元 黑色解剖皿 玻璃培养皿的边缘装满SYLG170或SYLG184（黑色，用细磨的木炭粉）。
在室温下放置 24-48 小时以聚合。 刀架 精细科学工具 10053 牛血清白蛋白 西格玛-奥德里奇 编号 A7906 双面胶带 3M 公司 665 果蝇和食品培养基，营养丰富 7.5% 蔗糖、15% 葡萄糖、2.5% 琼脂、20% 啤酒酵母、5% 蛋白胨、0.125% MgSO4.7H2O、0.125% CaCl2.2H20 果蝇和食品培养基，标准 布卢明顿果蝇股票中心玉米粉食谱。
（https://bdsc.indiana.edu/information/recipes/bloomfood.html） 固定液 4% formadehyde 的 PBS 溶液，pH 7.4。 钳子 精细科学工具 编号:91150-20 镊子应经常磨尖。 甲醛 Thermo Scientific 公司 28908 玻璃 9 孔培养皿 康宁 7220-85 号 也称为 9 孔培养皿 玻璃盖玻片 （22 x 22 mm） Fisher Scientific 公司 12-542-B 玻璃显微镜载玻片 （25 x 75 x 1 mm） Fisher Scientific 公司 12-550-413 玻璃培养皿 康宁 3160-100BO 型 甘油 西格玛-奥德里奇 G5516 系列 微离心管 Axygen （英语） MCT-175-C 系列 显微解剖剪刀 精细科学工具 15000-03 元 微孔盘（72 x 10 μL 孔） Nunc 系列 438733 安装介质 0.5% N-丙基没食子酸酯和 80% 甘油的 PBS 溶液 N-丙基没食子酸酯 西格玛-奥德里奇 P3130 PBS（磷酸盐缓冲盐水 pH 7.4） 西格玛-奥德里奇 货号 P5368 根据制造商的说明进行准备 帝札 0.15% TritonX 和 0.5% 牛血清白蛋白的 PBS 溶液，pH 7.4 销架 精细科学工具 ¥26016-12 一抗:山羊抗 GAPDH 抗体 伊金克斯 IMG-3073 型 用于蛋白质印迹。以 1:3000 使用时间 一抗:兔抗裂解 Dcp-1 细胞信号转导 9578S 系列 用于免疫荧光。1:100 使用 一抗: 大鼠 anti-DEcad 发育研究杂交瘤库 DCAD2 用于免疫荧光。1:20 使用 一抗: 大鼠 anti-DEcad DOI: 10.1006/dbio.1994.1287 DCAD1 由 Tadashi Uemura 赠送。在 1:100 使用。 手术刀刀片 精细科学工具 10050 元 折断一小块刀片并固定在刀架中。 二抗:488 偶联的驴抗大鼠 IgG （H+L） 杰克逊免疫研究 712-545-153 用于免疫荧光。1:200 使用 二抗:cy3 偶联的山羊抗兔 IgG （H+L） 杰克逊免疫研究 电话:111-165-144 用于免疫荧光。1:100 使用 二抗:HRP 偶联的山羊抗大鼠 IgG （H+L） Cell Signaling 技术 7077 元 用于蛋白质印迹。以 1:3000 使用时间 二抗:HRP 偶联的兔抗山羊 IgG （H+L） 杰克逊免疫研究 305-035-003 用于蛋白质印迹。以 1:3000 使用时间 立体解剖显微镜（M60 或 M80） 徕卡显微系统 或类似显微镜 Sylgard （黑色） 道康宁 SYLG170 Sylgard（透明） 道康宁 SYLG184 黑色，带有精细研磨的木炭粉 纸巾:Kimwipes 金泰克 邮编 34120 TritonX 西格玛-奥德里奇 编号 T8787 钨针，细 精细科学工具 编号 10130-10 插入销架 钨针，坚固 精细科学工具 邮编 10130-20 插入销架 酵母酱 （当地超市） 大约 2 汤匙 Fleischmann 的 ActiveDry 酵母（或类似物）溶于 ~20 mL 蒸馏 H 2 O 中

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