单细胞解离 秀丽隐杆线虫一种分离活细胞的方法

摘要

来源：Germany, E. M.，等。从线虫Caenorhabditis elegans中分离特定神经元群体。J. Vis. Exp. （2019）。

本视频介绍了一种将整条蠕虫解离为适用于流式细胞术分选或完整细胞免疫沉淀的单细胞悬液的方法。

方案

本实验方案节选自 Germany et al 的研究《从线虫 Caenorhabditis elegans中分离特定神经元群体》，发表于J. Vis. Exp. (2019)。

1. 细胞分离用衰老线虫的制备与收集

注意：以下所述为从明尼苏达大学 Caenorhabditis 遗传学中心（CGC）菌株库获取的转基因 unc-17::GFP 菌株（OH13083）中分离胆碱能神经元的方法。必须保持无菌条件，以防止真菌或细菌污染。

1. 采用Stiernagle所述的漂白法准备并同步线虫。进行衰老实验时，将线虫转移至含有25 µM氟脱氧尿苷（FuDR）水溶液的线虫生长培养基（NGM）平板上，以减少产卵并抑制卵的孵化。定期检查琼脂平板，防止污染或卵孵化，以免导致结果不可靠。
   注意： 对于 unc-17....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
琼脂，分子生物学级	VWR	A0930
CaCl2	Sigma	C5670
Contess 自动细胞计数仪	Invitrogen	Z359629
DTT	USBiological	D8070
FBS	Omega Scientific	FB-02
氟脱氧尿苷	Sigma	F0503
HEPES	Sigma	H3375
KCl	Amresco	O395
KH2PO4	USBiological	P5110
Leibovitz L-15 培养基	Gibco	21083027
MgCl2	Sigma	M8266
MgSO4	USBiological	M2090
Na2HPO4·7H2O	USBiological	S5199
NaCl	VWR	X190
NaOCl（漂白剂）	Clorox
青霉素-链霉素	Fisher Scientific	15140122
Pronase E	Sigma	7433	灰色链霉菌蛋白酶混合物
SDS	Amresco	O227
SMT1-FLQC 荧光体视显微镜	Tritech Research
蔗糖	USBiological	S8010