乙醇固定与DAPI染色：一种用于可视化 C. elegans 中DNA的方法

摘要

来源：Clarke, E. K. 等人。秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）中倍性的调控。J. Vis. Exp. （2018）。

本文介绍了一种用于在固定且完整的线虫中可视化基因组DNA的技术。视频中包含一个示例实验方案，用于计数未受精的C. elegans卵母细胞中的染色质。

方案

本方案节选自 Clarke et al 的文章《秀丽隐杆线虫倍性操作》，操纵 Caenorhabditis elegans， J. Vis. Exp. (2018)。

可以通过计数未受精卵细胞中的染色体数目来验证四倍体品系。如果品系带有染色体荧光标记，可利用荧光显微镜检测未受精二倍体卵细胞（减数分裂前）中染色体对的数量。在缺乏染色体荧光标记的情况下，可通过固定线虫并使用DNA染料染色来筛选四倍体线虫；以下提供了乙醇固定及整体动物4′,6-二脒基-2′-苯基吲哚二盐酸盐（DAPI）染色的实验方案。

整体动物DAPI染色

注意：可通过对携带12对连接染色体的四倍体品系进行DAPI染色，并计数其未受精卵细胞中DAPI信号体的数量，来验证该品系。

1. 加入5至10 µL M9缓冲液 在显微镜载玻片上放置一滴液体，然后将6至10条线虫转移至液滴中。
2. 在解剖显微镜下，用无绒擦拭纸吸去液滴中的大部分M9溶液，注意不要移....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
解剖显微镜	Motic Microscopy	SMZ171
名称	公司	目录编号	备注
染色
Hoechst 33258, Pentahydrate	Biotium	40045
DAPI	Biotium	40011
名称	公司	目录编号	备注
乙醇固定
乙醇，纯品，190 Proof（95%），USP	Koptec, VWR	89125-166
名称	公司	目录编号	备注
M9缓冲液
氯化钠，生物技术级	VWR	97061-278
磷酸二氢钾，无水级	VWR	97062-346
磷酸二氢钠二水合物	Fisher Scientific	AC271750025