游泳诱发性麻痹（SWIP）分析：量化C.elegans多巴胺介导运动的方法

摘要

资料来源：美国库杜马拉 等人。 游泳诱导麻痹，以评估多巴胺信号在卡诺哈布迪炎优雅。J. 维斯(2019).

在这里，我们引入一个检测来测量SWIP，一种在剧烈运动（如游泳）期间发生的C.elegans的行为表型。 示例协议讨论了手动和自动分析方法。

方案

以下协议是库杜马拉等人的摘录，游泳诱导麻痹，以评估多巴胺信号在卡诺哈布迪炎埃莱甘斯，J.Vis.Exp.（2019年）。 

交换

注：我们描述了用 AMPH 处理的野生类型蠕虫中评估 SWIP 的手动方法。我们还简要讨论了跟踪蠕虫和进一步分析蠕虫动力学使用自动蠕虫跟踪器和跟踪软件，这是以前描述的哈达威 等人。

1. 用于测试 SWIP 的手动方法
   1. 阿里报价 40 μL 的 200 mOsm/L 蔗糖溶液有或没有 0.5 mM AMPH 进入玻璃点板。在立体镜下，用睫毛或铂金挑选 8-10 晚 L4 阶段蠕虫，并将拾取物浸入包含溶液的板中，直到蠕虫离开拾取并游入溶液中。注意在井中采摘的蠕虫数量，启动正时器，观察并记录每分钟标记显示 SWIP 的蠕虫数量。
   2. 将原始数据复制到电子表格中，通过将每分钟瘫痪的蠕虫数量除以在整个检测中测试的蠕虫总数，并乘以 100，计算瘫痪蠕虫的百分比。将百分比值复制到任何图形和统计软件中，并使用 XY 图形格式在 Y 轴上绘制百分比值和 X 轴上的时间。
   3. 执行双向 ANOVA，然后进行临时分析（例如，邦费罗尼测试后），以测试控制、AMPH 组和治疗时间之间的统计意义。
2. 软件信息交换的自动分析
   1. 一次对一个蠕虫进行自动分析。设置摄像头的协议，蠕虫跟踪软件和脚本运行跟踪软件分析详细描述了在哈达威 等人。
   2. 简言之，使用睫毛采摘将单个后期 L4 阶段草本石放入玻璃斑板中，如第 1.1.2 节的手动方法所述。记录当时一只蠕虫的游泳视频，并使用蠕虫跟踪软件计算身体弯曲的频率。
   3. 按照跟踪软件提供的脚本获取蠕虫鞭打频率，并从蠕虫鞭打数据生成热图。

材料