温度梯度实验：一种检测温度偏好的方法 果蝇 幼虫

摘要

来源：Liu, J. 等。利用温度梯度实验测定果蝇幼虫的温度偏好。J. Vis. Exp. (2018)。

Drosophila 果蝇能够区分微小的温度变化，因此可以选择具有有利热条件的环境。本视频介绍了一种行为检测方法，用于测试 Drosophila 幼虫在直线温度梯度上的温度偏好。

方案

本方案节选自 Liu 等 一种用于测定生物体温度偏好的温度梯度实验方法 果蝇 幼虫， 视频实验杂志 (2018).

1. 温度梯度设置

1. 制备单向梯度
   1. 为在实验过程中创建湿润的环境，将连接至两个水浴的两块铝块放置在湿润的纸巾上，两者相距 10 cm（图 1A）。
   2. 在开始实验前约 2 小时开启两个水浴，以确保铝块温度达到平衡。
      注意：建议先进行一次模拟实验，以确定每个水浴所需的温度，从而实现理想的线性温度梯度。一些典型的水浴温度设置组合列于表 1中。但需注意，铝块表面温度会受到环境温度的影响。此外，由于管道中存在冷却效应，管道长度也会影响温度。本实验装置中管道长度为 1.5 m。
   3. 将 100 mL 的 1% 琼脂糖置于 500 mL 圆口广口瓶中，使用高功率微波加热，然后在水平实验台上每块实验平板倾注 25 mL。准备两块实验平板，以便可同时放置于铝块上（图 1A）。
   4. 待琼脂糖凝固后（10–20 分钟），用标准厨房海绵或密....

结果

图1：单向与双向梯度实验装置示意图。 (A) 单向梯度装置，包含两个置于铝块上的铝制实验板。铝块的温度通过两个水浴循环控温的水流进行调节。(B) 用于构建双向梯度的三个铝块、水浴装置及一块铝板（250 × 220 mm）的排列方式。左右两侧铝块连接至同一水浴，中间铝块连接至另一水浴。铝制实验板用胶带包裹形成10 mm高的围挡，以容纳1%琼脂糖。(C) 用于检测温度的位置（以圆点表示）以及幼虫释放位置。在开始实验前，需在每个区域内的两个位置测量温度，以确认已建立所需的线性温度梯度。幼虫释放于中线附近的指定区域内，并在各个2 cm宽的区域中计数。(D) 双向梯度中用于检测.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
梯度实验装置
PolyScience 9106，制冷/加热 6L 循环水浴	Thomas Scientific	9106	该型号已停产。更新的替代型号包括：适用于 120 V、60 Hz 的 1186R00 和 1197U04，或适用于 240 V、50 Hz 的 1184L08 和 1197U04。
铝制实验板（用于单向梯度）			外部尺寸：14 × 10.1 × 0.9 cm，内部尺寸：12.9 × 8.7 × 0.8 cm，黑色阳极氧化处理。
铝板（用于双向梯度）			25 × 22 × 0.2 cm，黑色阳极氧化处理。
铝块			外部尺寸：25.5 × 5 × 1.4 cm，内部通道参数见图 1D。
铝块与管路连接器	McMaster-Carr	91355K82
Tygon 卫生级硅胶管	Tygon	57296	内径 1/4"，外径 3/8"，壁厚 1/16"
名称	公司	货号	备注
实验所需物品与试剂
研钵	USA Scientific	17361	适用于 1.5 mL 微量离心管的研钵
温度计	Fluke	51II
热电偶	Fluke	K 型
通用微孔板盖	Corning	6980A77
35 mm 培养皿	Corning	9380D40
标签胶带（用于双向梯度）	Fisher Scientific	15-951	Fisherbrand 标签胶带，2 英寸 × 14 码
琼脂糖	Invitrogen	16500500	配制 1% 溶液
蔗糖	Sigma	S0389-5KG	实验开始前现配 18% 溶液
画笔	Fisher Scientific	11860
50 mL 离心管	Denville	C1062-P
药匙	Fisher Scientific	14-357Q
500 mL 圆口广口瓶	Pyrex	1395-500
细胞筛网（300 mm 孔径）	PluriSelect	43-50300	幼虫清洗可选用品
纸板盒（离心管架）	Genesee Scientific	FS32-124