制备 果蝇 心脏：一种研究成年果蝇心脏生理学的技术

摘要

来源：Vogler, G., Ocorr, K. 可视化跳动的心脏 果蝇. 视频实验杂志 (2009).

本视频介绍了果蝇的成体心脏，也称为黑腹果蝇（Drosophila）背血管。本展示方案演示了用于活体心脏标本制备的解剖操作步骤。

方案

本方案节选自 Vogler 和 Ocorr， 可视化跳动的心脏 果蝇， 视频实验杂志. (2009).

1. 开始前准备

1. 新鲜配制含108 mM Na的人工血淋巴（AH）溶液⁺，5 mM K+，2 mM Ca²⁺，8 mM MgCl₂，1 mM NaH₂PO₄，4 mM NaHCO₃₃，10 mM蔗糖，5 mM海藻糖，5 mM HEPES（pH 7.1，所有试剂均来自Sigma Chemicals）。蔗糖和海藻糖应在使用前临时从冷藏储备液中加入AH，以防止细菌污染。
2. 将AH升至室温，并通过通入空气至少15分钟以氧合溶液。
3. 拉取数根细玻璃毛细管（例如，Glass Capillaries，100 μl，VWR），用于脂肪去除。

2. 来自成年果蝇的半完整果蝇心脏

1. 成年果蝇用 Fly Nap（Carolina Biological Supply Co.）麻醉 2-5 分钟。必须注意不要让果蝇在 Fly Nap 中暴露过久。短期低温暴露也可用于麻醉果蝇，但 CO₂ 不推荐使用，因其对心率和心律的影响持续时间较长。
2. 将麻醉的果蝇背侧朝下放置于涂有薄层凡士林的培养皿中。果蝇翅膀和身体的疏水性表皮可逆地 "棒状物" 可以重新调整果蝇的位置。这在后续操作中尤为重要。
3. 使用弯头弹簧剪刀（Roboz #5611）进行初次切割。将剪刀刀片置于腿部下方，并朝向胸部背侧靠近颈部的方向倾斜。通过一次剪切去除头部、腹神经索和腿部。随后将标本浸入充氧的人工血淋巴（AH）溶液中。
4. 使用弹簧剪在腹部后端（由第7和第8腹节组成）进行一次剪切，移除该部分。由此可沿腹部两侧边缘进行侧向剪切，并切断后肠与腹部体壁之间的连接。随后移除游离的腹侧腹部体壁瓣。
5. 在步骤3和4中，切断肠道的前部和后部连接，此时腹部器官仅由气管细支固定位置。通常可使用珠宝商用镊子（Roboz，#55）轻柔牵拉，将肠道及其他腹部器官作为整体一并移除。移除内脏器官后，可暴露出仍附着于背侧表皮并被脂肪体包围的搏动心脏管。
6. 脂肪体在光学显微镜下不透明，因此通常需要去除部分脂肪以清晰观察心脏管。该操作采用细拉玻璃毛细管进行脂肪抽吸技术完成。毛细管使用标准的移液器拉制仪（如 Sutter P-97 移液器拉制仪）制备，随后插入塑料管（Tygon，1/16）中"连接至真空源的装置。该系统用于吸除心脏管周围多余的脂肪组织。吸力大小与吸头直径成正比，因此不应使用吸头直径大于40微米的移液器。操作时必须格外小心，避免接触心脏本身，且由于心脏后部极为脆弱，应完全避开该区域。
7. 成年果蝇心脏管现已暴露，应处于搏动状态。如有必要，可通过轻轻提起石蜡油中的体壁，并小心将其压平来重新定位体壁及附着的心脏，但需避免接触心脏组织。此时，应将浸泡标本的溶液更换为新鲜的AHL。在进行任何操作之前，应让标本在充氧条件下平衡20–30分钟。若标本需维持超过60分钟，则应以新鲜AHL进行灌注。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
显微解剖弹簧剪（弯型）	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5611	适用于粗略切割（步骤 2）
显微解剖弹簧剪（直型）	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5620
Dumont #55 镊子	Fine Science Tools	11295-51
Dumont #5 镊子	Fine Science Tools	11295-10
细玻璃毛细管	Science Products	GB100T8P
拉管仪	Sutter Equipment	P-97	水平和垂直拉管仪均可使用
塑料管	Tygon	1/16" 内径	用于 100 µL 毛细管
Histoacryl® 组织粘合剂	B. Braun Medical