产卵实验：一种用于定量分析秀丽隐杆线虫（C. elegans）产卵行为的方法

摘要

来源：Lee, S. Y. 和 Kang, K. 测量化学物质对 Caenorhabditis elegans生长与繁殖的影响。 J. Vis. Exp. (2017)。

C. elegans 的产卵行为可为发育、生殖和解剖学研究提供重要信息。  本视频介绍了产卵实验的关键步骤，并展示了一项检测药物生殖毒性的示例实验。

方案

李 和 Kang， 测量化学品对生物生长与繁殖的影响 秀丽隐杆线虫, 视频实验杂志 (2017).

1. C. elegans 产卵实验

1. 将年龄同步的卵在含有 DMSO 或依托泊苷的 NGM 平板上于 20 °C 条件下孵育 64 小时（首次产卵前），直至发育至年轻成虫阶段。
   注意：可选择使用生长测量实验中的线虫。将生长测量与产卵实验同时进行较为方便。
2. 将 5 条成虫转移至不含化学物质的新 NGM 平板（条件 1：特定时间段内的化学处理，从卵至年轻成虫阶段），或转移至含有相同化学预处理的新 NGM 平板（条件 2：在整个实验期间持续暴露于化学物质），随后孵育 24 小时。
   注意：建议每种处理设置 3–5 个 NGM 平板作为重复；这些重复可用于统计分析。
3. 按上述方法转移至新的 NGM 平板，并每天计数产卵数量。同时记录爬出平板、死亡及体内孵化的线虫数量。
4. 重复上述步骤，直至线虫不再产卵，通常持续 5 天。
5. 计算每个平板上每条线虫的产卵数，并将连续 5 天的数值累加，以确定总产卵数。
   注意： 在计算中应排除爬出平板及体内孵化的线虫数量。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
秀丽隐杆线虫 N2	秀丽隐杆线虫遗传中心 (CGC)		野生型
二甲基亚砜	Sigma，美国	D2650
大肠杆菌 OP50	秀丽隐杆线虫遗传中心 (CGC)
依托泊苷	Sigma，美国	E1383
35 × 10 mm 培养皿	SPL Life Sciences，韩国	10035
体视显微镜	尼康，日本	SMZ800N