C. elegans 化感行为检测实验：一种用于检测线虫化学感应能力的方法

摘要

来源：Campbell, J. C.，等。一种基于秀丽隐杆线虫营养状态的铜回避检测方法。J. Vis. Exp. (2017)。

本视频介绍了秀丽隐杆线虫（C. elegans）中的趋化性，并展示了一项检测其对硫酸铜趋化回避反应的示例实验方案。

方案

以下方案摘自 Campbell 等 A 秀丽隐杆线虫 基于营养状态的铜厌恶检测法 视频实验杂志 (2017).

1. 实验生物材料的制备
   1. 每种品系在开始实验前24小时挑选10只L4期线虫，以确保检测时线虫处于年轻成虫阶段。对每种待测的突变株或对照线虫，分别挑选10只L4期个体（10只用于对照，10只用于实验）。
      1. 使用接种了OP50的标准琼脂平板，按照标准方法培养L4期生物体24小时 大肠杆菌如果在后续洗涤步骤中出现生物体丢失，可通过增加起始样品量来补偿（即 挑选20条而非10条线虫。
         注意： 行为是一种具有内在变异性的表型。每种菌株均需在三个独立的实验日各进行三次重复实验。对于新菌株，应增加对照菌株和实验条件，具体参见讨论部分的说明。
   2. 在检测前立即转移实验用生物体至无细菌的琼脂平板上，让线虫自由移动1分钟，以去除多余的细菌。
      1. 若实验生物在检测前24小时内暴露于污染条件下，则应弃用。
   3. 用移液器将1 mL M9加入无菌平板中，冲洗线虫至微量离心管中。
   4. 在3,000 × g离心1分钟....

结果

图1：在5 cm培养皿底部标记铜溶液放置位置的可视化示意图。 这些标记用于确保平板各区域已准确测量，并在将细菌菌块以及铜溶液转移至琼脂表面时提供操作指引。

图2：将5 cm的培养皿分为两个区域，分别用于“有食物”和“无食物”检测平板，并在其.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
M9 溶液 [3 g KH2PO4，6 g Na2HPO4，5 g NaCl，1 ml 1 M MgSO4，加 H2O 至 1 升。使用前高压灭菌]			实验室制备
硫酸铜	Sigma	C-1297	用水适当悬浮至 0.5 M 浓度