钙成像：一种在活体 C. elegans 中可视化神经活动的方法

摘要

来源：Turek, M. 等. 用于长期钙成像的琼脂糖微室 秀丽隐杆线虫. 视频实验杂志 (2015).

本视频介绍了钙成像背后的概念，并包含一个示例方案，用于对置于模制琼脂糖小孔中的线虫进行延时成像。

方案

本方案节选自 Turek 等 用于长期钙成像的琼脂糖微腔室 秀丽隐杆线虫, 视频实验杂志 (2015).

1. 钙成像

1. 使用表达遗传编码钙传感器的转基因品系，例如 HBR16（goeIs5[pnmr-1::SL1-GCaMP3.35-SL2::unc-54-3'UTR, unc-119(+)]）。
2. 使用配备宽场落射荧光装置的复式显微镜。将 EMCCD 相机的 TTL 输出连接至 LED 的 TTL 输入端，使得每次相机采集一帧图像时样品即被照明。曝光时间约为 5 毫秒，EM 增益设置在 50–300 范围内。
3. 设定连续拍摄电影模式，持续 24 小时，每隔 15–30 分钟对每条线虫成像一次：首先以微分干涉差（DIC）成像 20 秒，随后以 GFP 荧光成像 20 秒以记录 GCaMP 信号，最后采集 mKate2 信号的单张图像以监测表达水平。每次成像爆发期间的帧速率为每秒 2 帧。
4. 为便于目视检查数据，使用伪彩图以增强荧光强度微小变化的可见性。将荧光数据绘制成 ΔF/F 曲线，其中 F 代表荧光的平均基线值。钙信号数据分析的详细描述可参见相关文献。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
LED 系统	CoolLED	pE-2
复式显微镜	Nikon	TiE
EMCCD 相机	Andor	iXon 897	现售型号为 iXon Ultra 897
显微镜 Z 轴载物台	Prior	Nano Scan Z
显微镜 X-Y 轴载物台	Prior	Proscan III
红光滤光片	Chroma	ET660/50m
35 mm 培养皿	Falcon	Falcon Disposable Petri Dishes, Sterile, Corning