本方案节选自&#160;Turek 等&#160;<a href="https://www.jove.com/video/52742/agarose-microchambers-for-long-term-calcium-imaging-caenorhabditis">用于长期钙成像的琼脂糖微腔室&#160;秀丽隐杆线虫</a>,&#160;视频实验杂志&#160;(2015).
1. 钙成像
<ol>
	<li>使用表达遗传编码钙传感器的转基因品系，例如 HBR16（goeIs5[pnmr-1::SL1-GCaMP3.35-SL2::unc-54-3'UTR, unc-119(+)]）。</li>
	<li>使用配备宽场落射荧光装置的复式显微镜。将 EMCCD 相机的 TTL 输出连接至 LED 的 TTL 输入端，使得每次相机采集一帧图像时样品即被照明。曝光时间约为 5 毫秒，EM 增益设置在 50–300 范围内。</li>
	<li>设定连续拍摄电影模式，持续 24 小时，每隔 15–30 分钟对每条线虫成像一次：首先以微分干涉差（DIC）成像 20 秒，随后以 GFP 荧光成像 20 秒以记录 GCaMP 信号，最后采集 mKate2 信号的单张图像以监测表达水平。每次成像爆发期间的帧速率为每秒 2 帧。</li>
	<li>为便于目视检查数据，使用伪彩图以增强荧光强度微小变化的可见性。将荧光数据绘制成 ΔF/F 曲线，其中 F 代表荧光的平均基线值。钙信号数据分析的详细描述可参见相关文献。</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>LED 系统</td><td>CoolLED</td><td>pE-2</td><td></td></tr><tr><td>复式显微镜</td><td>Nikon</td><td>TiE</td><td></td></tr><tr><td>EMCCD 相机</td><td>Andor</td><td>iXon 897</td><td>现售型号为 iXon Ultra 897</td></tr><tr><td>显微镜 Z 轴载物台</td><td>Prior</td><td>Nano Scan Z</td><td></td></tr><tr><td>显微镜 X-Y 轴载物台</td><td>Prior</td><td>Proscan III</td><td></td></tr><tr><td>红光滤光片</td><td>Chroma</td><td>ET660/50m</td><td></td></tr><tr><td>35 mm 培养皿</td><td>Falcon</td><td>Falcon Disposable Petri Dishes, Sterile, Corning</td><td></td></tr></tbody></table>

钙成像：一种在活体 c. elegans 中可视化神经活动的方法

来源：Turek, M. 等. <a href="https://www.jove.com/video/52742/agarose-microchambers-for-long-term-calcium-imaging-caenorhabditis">用于长期钙成像的琼脂糖微室&#160;秀丽隐杆线虫.</a>&#160;视频实验杂志&#160;(2015).
本视频介绍了钙成像背后的概念，并包含一个示例方案，用于对置于模制琼脂糖小孔中的线虫进行延时成像。

钙成像：一种在活体 C. elegans 中可视化神经活动的方法

来源：Turek, M. 等。用于长期钙成像的秀丽隐杆线虫琼脂糖微室。J. Vis. Exp. (2015)。  
本视频……

- 放置 一 转基因的 蠕虫 表达 GCaMP-- a 钙 传感 蛋白-- 在 一个 成像 腔室 沿 与 细菌 食物 用于 的 蠕虫 然后 密封 的 培养皿 与 的 盖子 和 实验室 薄膜 到 防止 蒸发 查看 它 在……下方 a 化合物 显微镜 配备 用于 宽视野 领域 落射荧光 记录 时间 失误 图像 的 的 线虫 到 追踪 它们的 行为 和 捕获 荧光 使用 成像 软件 转基因 蠕虫 表达 a GCaMP 传感器 蛋白 在……下方 的 对照 的 a 启动子 那 驱动 GCaMP 表达 在 a 特异的 神经元 当 那 神经元 是 活化的， 它 火灾 一个 动作 电位 哪个 去极化 的 血浆 膜 在……之后 去极化， 电压门控 钙 通道 开放 在 的 血浆 膜 这 导致 一个 流入 的 钙 离子 进入 的 细胞 导致 在 神经元的 激发 GCaMP 在 的 兴奋的 神经元 结合 的 钙 离子 此 导致 GCaMP 到 荧光 当 的 线虫 是 成像 与 a 低 强度 荧光 激发 光 在 的 示例 方案 我们 将 使用 钙 成像 到 可视化 AVA 中间神经元 活性 在 转基因的 C. elegans 在 琼脂糖 微室 - 钙成像 在 一台 配备 宽场 落射 荧光 功能 的 复合 显微镜 上 进行 。为 限制 光照 暴露 ， 使用 一个 晶体管-晶体管 逻辑 信号 来 触发 LED ， 在 相机 采集 一帧 图像 的 同时 对 样品 进行 照明 。 运行 a 爆发 视频 用于 24 小时 那 图像 每个 蠕虫 每个 15 到 30 分钟 首先， 记录 20 秒 与 弥散性血管内凝血 然后 20 秒 与 GFP 荧光 和 最后， 一个 图像 的 的 mKate2 信号 用于 对照 表达 水平 对于 视觉 数据 检查 使用 a 错误 颜色 地图 到 增强 的 可见度 的 小 变化 在 荧光 强度 最后， 执行 钙 数据 分析 使用 标准 步骤。

calcium-imaging-method-to-visualize-neural-activity-live-c

Research

科研

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biology

生物学

Caenorhabditis elegans (worm)

秀丽隐杆线虫

Microscopy

显微镜学

Calcium Imaging: A Method to Visualize Neural Activity in Live C. elegans

钙成像:一种可视化活秀丽隐杆线虫神经活动的方法

2.7K 次观看. - 将一条表达 GCaMP（一种钙传感蛋白）的转基因蠕虫与蠕虫的细菌食物一起放入成像室中。然后用盖子和实验室胶片密封培养皿以防止蒸发。在配备宽视场落射荧光的复合显微镜下观察它。记录蠕虫的延时图像以跟踪其行为并使用成像软件捕获荧光。转基因蠕虫在驱动特定神经元中 GCaMP 表达的启动子控制下表达 GCaMP 传感器蛋白。当该神经元被激活时，它会触发动作电位...

钙成像：一种在活体 C. elegans 中可视化神经活动的方法

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姓名	公司	目录编号	评论
LED 系统	CoolLED	pE-2
复式显微镜	Nikon	TiE
EMCCD 相机	Andor	iXon 897	现售型号为 iXon Ultra 897
显微镜 Z 轴载物台	Prior	Nano Scan Z
显微镜 X-Y 轴载物台	Prior	Proscan III
红光滤光片	Chroma	ET660/50m
35 mm 培养皿	Falcon	Falcon Disposable Petri Dishes, Sterile, Corning