FITC-葡聚糖饲喂法：一种定量检测肠道通透性的方法 秀丽隐杆线虫

摘要

来源：Le, T. A. N., 等. 测量细菌和化学物质对肠道通透性的影响 秀丽隐杆线虫. J. Vis. Exp. (2019).

本视频介绍了一种通过喂食荧光素异硫氰酸（FITC）标记的葡聚糖来可视化并检测C. elegans肠道管腔完整性的方法。示例实验方案展示了使用3,3’-二吲哚基甲烷（DIM）处理并喂食病原菌的线虫进行该检测的过程。

方案

本实验方案节选自 Le et al，《测量细菌和化学物质对秀丽隐杆线虫肠道通透性的影响》，Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2019)。

1. 用于检测化学物质（DIM）对线虫肠道通透性影响的NGM平板的制备 秀丽隐杆线虫 喂食 P. aeruginosa
   1. 向500 mL玻璃瓶中加入0.5 g蛋白胨、0.6 g NaCl、195 mL蒸馏水、一个磁力搅拌子和6.8 g琼脂（NGM琼脂）。
   2. 向另一个500 mL玻璃瓶中加入0.5 g蛋白胨、0.6 g NaCl、195 mL蒸馏水和一个磁力搅拌子（不含琼脂），配制NGM液体培养基。
   3. 将两个瓶子（步骤1.1–1.2）、一个空的100 mL玻璃瓶和一个空的500 mL玻璃瓶在121 °C下高压灭菌15分钟。然后，将装有....

结果

图1：DIM对摄食P. aeruginosa的C. elegans肠道通透性的影响。 虫体的显微图像来自以下组别：（A）未饲喂FITC-葡聚糖的E. coli OP50组；（B）饲喂FITC-葡聚糖的E. coli组；（C）饲喂FITC-葡聚糖的P. aeruginosa PAO1组；以及（

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
3,3’-二吲哚基甲烷 	Sigma	D9568
90×15 mm 培养皿	SPL Life Sciences, South Korea	10090
细菌琼脂	Beckton Dickinson	REF. 214010
甲醛溶液 	Sigma	F1635
秀丽隐杆线虫 N2	秀丽隐杆线虫遗传中心（CGC）		野生型 
胆固醇	Sigma	C3045
Costa 检测板，96 孔黑色带透明平底未经处理的聚苯乙烯板，无盖	Corning Incorporated	REF. 3631
二甲基亚砜	Sigma	D2650
大肠杆菌 OP50	秀丽隐杆线虫遗传中心（CGC）
异硫氰酸荧光素-葡聚糖	Sigma	FD10S
Harmony 软件 	PerkinElmer		版本 3.5
七水合硫酸镁 	Fisher Bioreagents	BP2213-1
Fluoromount 水性封片介质	Sigma	F4680
Operetta CLS 高内涵分析系统	PerkinElmer	 HH16000000
蛋白胨	Merck	EMD 1.07213.1000
铜绿假单胞菌 PA01	韩国典型培养物保藏中心	KCTC NO. 1637
氯化钠	Fisher Bioreagents	BP358-1
体视显微镜	Nikon, Japan	SMZ800N