逃避反应检测：一种研究斑马鱼幼虫对触觉刺激反应的方法

摘要

来源：Sztal, T. E., 等. 利用触觉诱发反应与运动行为检测评估斑马鱼肌肉功能与性能. J. Vis. Exp. (2016)

本视频介绍了触觉诱发反应检测方法，该方法用于测量斑马鱼幼虫对触觉刺激的反应。

方案

1. 触发反应检测实验

1. 2 dpf 胚胎触诱发应实验的制备
   1. 确保每次实验的测试时间保持一致，因为活动水平在一天中可能有显著变化。
      ​注意实验应采用盲法进行，并对测试顺序进行随机化，以尽量减少实验偏差。
   2. 为鱼品系分配一个编号，该编号对执行实验的个体保持盲态。随后，利用可免费获取的在线工具生成一个随机列表，以确定测试顺序。
   3. 至少在测试前一小时，用精细镊子在卵膜上撕开一个小孔，然后轻轻将卵膜分开以去除胚胎的卵膜。在将培养皿放回28 °C培养箱之前，清除培养皿中的任何碎片。
2. 执行触觉诱发反应实验
   1. 在开始测试前至少15分钟将加热台预热至28 °C。
      ​注意：该阶段需控制温度，在整个测试过程中保持在28 °C。温度会影响活性，因此维持恒定温度至关重要。若无加热载物台，应监测水温，并确保所有实验在相同温度下进行。
   2. 将含有胚胎培养基（5 mM NaCl，0.17 mM KCl，0.33 mM CaCl₂，0.33 mM MgCl₂，0.3 mM MgSO₄，0.2 mM KH₂PO₄，0.1 mM Na₂HPO₄，25 mM NaHCO₃，10 mM HEPES，1 mM 丙酮酸钠，100 U/mL 青霉素，100 μg/mL 链霉素，2 mM 谷氨酰胺，10% 胎牛血清）的培养皿置于显微镜载物台上₂，0.33 mM MgSO₄₄ 将水中的样品置于照明的载物台上，并在培养皿上方安装高速摄像机。
   3. 启动视频摄像记录软件（例如此处所述的 Stream Pix 5），并在 "工作区" 将捕获速度设置为每秒1,000帧（1,000 fps），以确保记录鱼类的快速游动行为。
   4. 一次处理一个胚胎，将胚胎置于培养皿中央，使斑马鱼在视野中清晰可见。
      ​注意如果胚胎在实验开始前游走，应更换为另一个胚胎，因为重新捕获和定位胚胎可能导致其对刺激产生脱敏，且重复的爆发反应可能在某些疾病模型中引发肌肉无力。
   5. 单击开始录制 "记录" 按钮，并用钝针轻轻触碰胚胎头部顶端，以传递机械感觉刺激。
   6. 在胚胎游出视野或恢复静止状态后停止录像。
      ​注意：机械刺激后，爆发式逃逸反应的加速度峰值出现在前0.2秒内。因此，需确保在逃逸反应记录的最初0.2秒内，鱼体始终位于视野范围内。使用软件 Stream Pix 5 时，数据将自动保存为 .avi 视频文件。也可使用其他免费的视频捕获软件，例如 Free Video Capture 或 Softonic，两者均可免费下载。
   7. 将胚胎移回新的培养皿，并另选一个胚胎进行检测。至少对15条鱼进行检测。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
90 mm 培养皿	Pacific Laboratory Products	PT S90001
镊子，8 型	ProSciTech	T04-821
培养箱	Thermoline Scientific	TEI-43L
高速相机	Baumer	HXC20
StreamPix5	NorPix		步骤 1.2.3
温度控制单元	Viewpoint
http://www.randomization.com	N/A		步骤 1.1.2