光暗偏好测试：研究斑马鱼焦虑相关行为的方法

摘要

资料来源：美国霍尔科姆 等人。 一种新的药物管理方法，以多个斑马鱼（达尼奥雷里奥）和定量戒断。 J. 维斯(2014)

该视频描述了光暗偏好分析，以研究斑马鱼在接触乙醇后与焦虑相关的行为。

方案

1. 行为测试

1. 获得一个9.5厘米宽，55厘米长，9.5厘米深的白色防水地板（图1B）。用天鹅绒将白色和黑色防水非反射纸贴在竞技场的内壁上，一半的竞技场覆盖着白色，一半覆盖着黑色。在 25-28 °C 的温度下，用生境水将竞技场填满到 5 厘米深。 在整个测试过程中保持此温度。
2. 通过为竞技场建造一个白色的三面外壳，将外部视觉刺激最小化。确保测试区域具有不会对水面造成反射的弥漫式头顶照明，但对于运动跟踪软件或视频图像的临时手动量化而言，该照明足够明亮。
3. 将竞技场放置在外壳中，并设置行为跟踪软件的记录和运动分析参数。根据研究问题，将试用期设置为 5-15 分钟。
   注意：在这里，我们用了5分钟。
4. 将鱼群运送到栖息地水箱中的研究区域进行测试，并将其放置在竞技场外。将鱼吸10分钟。
5. 轻轻地网从适当的组和放置在光明/黑暗竞技场的中心，一定要释放鱼时，它的位置平行于竞技场的长轴，以避免偏向鱼的光或暗区。
6. 动物被释放后立即开始记录行为。注意跟踪鱼或鱼跳跃或冷冻的任何软件问题。在一半的受试者经过测试后旋转竞技场 180° 以防止由于竞技场的哪个一端面向外壳的开放端而产生的偏差而产生任何混淆。
7. 试验结束后，轻轻网，将鱼从竞技场移到储罐或栖息地的鱼缸中。

2. 分析

1. 检查在光区与暗区花费的时间。对于每组和每条鱼，获取在光和暗区域花费的相对时间，并使用一个样本t测试（或 Wilcoxon 签名的非参数数据排名测试;与（总试用时间的一半）150 秒的差异）进行分析，以确定组是否明显偏爱一个区域而不是另一个区域。
2. 要比较偏好，请通过从在暗区花费的时间中减去在光区花费的时间来计算偏好指数，并比较组之间的差异。t-测试可用于比较两组。比较多个组与使用 Tukey 的 HSD 后临时测试（或 Kruskal-Wallis 测试与 Dunn 的多个比较后非参数数据的临时测试）的差异单向分析。
3. 比较速度、区域转换次数、蜿蜒和跨组不动。在必要时使用 Tukey 的 HSD 后临时测试（或使用 Dunn 的多重比较后非参数数据的多重比较后测试）对方差进行单向分析。

结果

图1：转移程序和光/暗竞技场。这些照片说明了转移过程。（A）首先，鱼位于转移罐中（左）。图为含有乙醇的配水罐（右图）。（B-C）将鱼从转移罐转移到乙醇溶液中，需要研究人员将产卵插入物从转移罐中提起并放入乙醇溶液罐中。（D）如图所示的光/暗竞技场宽9.5厘米，深9.5厘米，长55厘米。使用白色地板，以及竞技场一半（左）的黑色墙壁和另一半的白色墙壁，形成一个光明和黑暗的区域。

材料