斑马鱼避免和硫化物分析：一种高通量方法，以检查拉瓦尔行为，以响应逆向视觉刺激

Abstract

资料来源：里肯德弗、H. 等人。 斑马鱼幼虫的自动高通量行为分析。 J. 维斯(2013)

该视频描述了斑马鱼幼虫的回避和硫化物检测。该视频检查斑马鱼幼虫的行为，以回应视觉逆向刺激。

Protocol

1. 图像捕获

1. 板的每个车道最多可放置 20 个幼虫。通常每个车道有5个幼虫，用于最准确地跟踪游泳速度，并减少每个实验所需的幼虫数量。车道上可以装满鸡蛋水，有或没有药物或有毒物质，这取决于实验。但是，车道在放置在成像柜中之前不应一直填满：这将防止溢出。为了保持一致性，幼虫应有一个适应期十分钟后，他们被放置在阿加罗斯模具和定位在笔记本电脑屏幕的顶部。有效地将幼虫从培养皿转移到高玫瑰巷将有助于减少幼虫的压力。当幼虫被安置在浅水箱或培养皿中时，这是最容易的。
2. 成像柜包括用于延时摄影的佳能数码相机和笔记本电脑。相机应放置在机柜顶部，面向机柜底部，其中 15.6 英寸屏幕笔记本电脑应放置屏幕朝上 （图 1）。四个板应直接用手放置在笔记本电脑屏幕的顶部。此时，车道可以加上蛋水或化学处理，使其与车道顶部水平（以消除图像中车道边缘的阴影）。
3. PowerPoint 演示文稿用于对幼虫进行逆向刺激。过去，移动的红球被展示给斑马鱼幼虫在6或12个多井板。当前的 PowerPoint 从空白的白色背景开始 15 分钟，然后是板上半部分移动的红色条形 15 分钟（图 2）。为了消除幼虫过热，最好购买屏幕温度不超过 28 °C 的笔记本电脑。 为了避免液体在阿加罗斯车道内蒸发，最大成像时间应保持在一小时以下。
4. 数码相机应编程为延时摄影，每 6 秒拍摄一次，每个实验总共拍摄 300 张图像。但是，频率和长度可以根据实验和行为定量进行调整。过去，使用延长的成像时间使用每个图像之间的较长间隔。摄像机可以以较低的分辨率设置，以视频速度成像（每秒 30 帧）。虽然较低的分辨率将录制限制为单个多井板，但视频录制适合成像快速游泳活动。

Results

图1。成像柜。成像柜是专门在我们的实验室中制造的，用于高通量的行为分析。一台 1500 万像素的数码相机连接到朝下的机柜顶部，以便收集放置在笔记本电脑屏幕顶部的多边板幼虫的延时图像。在板和屏幕之间有一个塑料扩散器，用于防止收集的图像中的 moir® 图案。

图2。空白背景和幻灯片逆向刺激。这是当前用于唤起斑马鱼幼虫行为变化的 PowerPoint。它提供了A）空白背景和B）移动红条之间的强大行为差异。

Materials