靶向肝脏消融：利用甲硝唑在转基因斑马鱼幼虫中诱导肝细胞死亡

摘要

来源：Choi T.Y.，等。利用斑马鱼肝细胞特异性消融研究胆管驱动的肝脏再生。J. Vis. Exp. (2015)

本文介绍了一种在转基因斑马鱼幼鱼中利用甲硝唑诱导肝细胞死亡的靶向性肝脏消融方法。示例实验方案详细描述了在斑马鱼中建立、操作和评估靶向性肝脏消融的过程。

方案

1. 胚胎/幼虫的制备

1. 将100个胚胎转移至含有25 ml 胚胎培养液的100 mm 培养皿中。每个培养皿中培养的胚胎数量不超过100个，并在28 °C条件下培养。
2. 为抑制色素形成，在受精后10小时（hpf）之前向培养皿中加入苯硫脲（PTU），并将胚胎/幼鱼培养至80 hpf。PTU的终浓度为0.2 mM。
   注意：PTU具有毒性，请依照适当的操作规范使用。
3. 通过向培养皿中加入终浓度为0.016%的3-氨基苯甲酸乙酯（Tricaine）对幼鱼进行麻醉。然后使用落射荧光显微镜筛选CFP阳性幼鱼。选择肝脏大小相近的幼鱼，剔除肝脏过小或过大的个体。
   注意：任何CFP阳性的幼鱼均可使用，无论其荧光强度如何，因为杂合子与纯合子幼鱼在肝细胞消融程度上无差异。
   注意：Tricaine具有毒性，请依照适当的操作规范使用。
4. 移除含有Tricaine的胚胎培养液，更换为添加了0.2 mM PTU的胚胎培养液。将胚胎/幼鱼继续在28 °C条件下培养。

2. Mtz 处理

1. 通过将 0.171 g 甲硝唑（Mtz）粉末溶解于 100 ml 含 0.2% DMSO 和 0.2 mM PTU 的蛋水中，配制新鲜的 10 mM Mtz 溶....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
3-氨基苯甲酸乙酯（Tricaine）粉末	Sigma-Aldrich	A5040	配制 0.4%（15 mM）Tricaine 储存液：将 0.4 g Tricaine 溶于 100 mL 卵水（egg water）中，调节 pH 至 7。
二甲基亚砜（DMSO）	Sigma-Aldrich	D8418
甲硝唑	Sigma-Aldrich	M1547
N-苯硫脲（PTU）	Sigma-Aldrich	P7629
100 × 15 mm 培养皿	Denville Scientific Inc.	M5300
卵水（egg water）			在蒸馏水中加入 0.3 g/L 海盐 ‘Instant Ocean’ 和 0.5 mM CaSO₄。
落射荧光显微镜	Leica Microsystems	M205FA