交配和卵子分期：一种按发育阶段生成胚胎和分拣胚胎的方法

Abstract

资料来源：旅舍T.L. 等人。 斑马鱼基于RNASeq的基因表达数据的样本准备和分析。 J. 维斯 (2017)

本文描述了通过自然交配和分拣斑马鱼发育阶段产生斑马鱼胚胎的协议。该协议进一步用于使用转基因鱼分析胰腺β细胞。

Protocol

1. 通过自然交配产生胚胎

1. 培养胚胎至3个月大，生殖成熟。
2. 在胚胎采集前一天晚上，将成年雄性鱼和雌性鱼从所需菌株中分离成分开的交配罐，并在每个鱼缸中加入2只雄性鱼和3只雌鱼。
   注：使用转基因胰岛素2a：MCherry荧光记者应变允许胰腺β细胞的分析。
3. 将鱼用新鲜系统水将鱼转移到交配罐中，并在第二天早上灯亮后立即取出分隔线。
4. 允许鱼自然交配，直到在底部的鱼缸中观察到胚胎。每隔30分钟收集胚胎，直到收集所需的数量。在 28.5 °C 的胚胎介质中将每个收集的时间点存储在单独的培养皿中。
5. 如果需要，对遗传物质进行微注入或放置在实验培养介质中，并在28.5°C的10厘米培养皿中培养新鲜汉克胚胎介质中的胚胎。
   注意：对于注射动物或突变动物的变异动物的基因表达分析，请注意，每次操作都可能对基因表达产生附带影响。突变体可以在基于MO的基因靶向所未观察到的转录水平上表现出遗传补偿。

2. 阶段胚胎

1. 培养胚胎组50×75胚胎每10厘米培养皿，以促进所有胚胎的一致发育时机。
2. 使用在爆炸、表皮和木乃伊阶段解剖显微镜监测发育形态，以确保发育进展。
   注意：取出任何垂死或畸形的胚胎，以防止培养皿发育迟缓。
3. 根据发育年龄分离胚胎。在 24 hpf 后使用总体长分阶段胚胎和幼虫。
   注：这些软体是存在于胚胎后部的雪佛龙形中皮组织。

Materials