从尾夹中提取DNA：斑马鱼基因型平中使用的方法

Abstract

资料来源：星L 等人。 快速高效斑马鱼基因型使用PCR与高分辨率熔体分析。 J. 维斯 (2014).

本文描述了从斑马鱼尾夹中提取的DNA。该协议展示了一种快速高效的方法来分析斑马鱼的基因型。

Protocol

1. 脱氧核糖核酸制备

1. 准备DNA裂解缓冲：50米KCl，10米特里斯-HCl pH 8.3，0.3%补间20，0.3%NP40。在使用当天加入新鲜蛋白酶 K，最终浓度为 1 毫克/毫升。
2. 组织收集：
   1. 对于成人鱼翅夹：
      1. 麻醉鱼：将鱼放在0.004%MS-222（三卡因）溶液中。等到刺运动减慢。
      2. 将鱼放在一叠 5-10 Kimwipes 上，用无菌剃须刀刀片切开一小块约 2-3 毫米的尾鳍。
      3. 迅速将鱼放在贴有淡水的标签水箱中，以进行恢复：仔细标记罐和相应的管，将包含鳍夹。换水每隔一天喂一次鱼。
      4. 用无菌移液器尖端拾取鳍夹，并将其转移到装满 100 μl DNA 裂解缓冲器的管中。
      5. 丢弃移液器尖端，并将剃须刀刀片丢弃到锋利的容器中。
   2. 对于胚胎尾夹：
      1. 将胚胎放入 0.004% MS-222 （三卡因） 溶液中。等待2分钟。
      2. 在解剖显微镜下用钳子切一条尾巴。
      3. 将尾部放入一个贴有标签的管子中，该管中充满 30μl DNA 裂解缓冲器。
      4. 迅速将胚胎放入含有100微克4%副甲醛的管子里。
      5. 带有胚胎及其相应尾管的标签管。
      6. 将带有胚胎的管子存放在 4 °C 过夜进行固定。
      7. 使用米利-Q水和每个胚胎之间的金钳清洁钳子，以尽量减少污染。
   3. 对于整个胚胎：
      1. 将胚胎放入 0.004% MS-222 （三卡因） 溶液中。等待2分钟。
      2. 将1-5个胚胎放入充满100μlDNA裂解缓冲器的管子里。没有必要去劝告。
3. 脱氧核糖核酸消化
   在 55 °C 处用组织（鳍或尾夹或胚胎）孵化管，长达 4 小时，直至过夜。
4. 灭活蛋白酶 K
   加热管至 95 °C 15 分钟。 DNA 应立即用于 PCR，或储存在 -20 °C 长达 3 个月。

Materials