阿加安装：安装活斑马鱼胚胎进行长期成像的基本方法

Abstract

资料来源：哈格多恩· 通过外科融合发展布拉苏拉产生寄生虫斑马鱼胚胎。J. 维斯(2016).

此视频描述了使用低熔性蔗糖在 6 个井板上安装活斑马鱼胚胎的分步说明。它还提供了获取活胚胎图像并使用软件分析活胚胎的过程。

Protocol

1. 显微镜设置、图像采集、处理和分析

1. 准备 0.8% 低熔点 （LMP） agarose： 将 0.8 g LMP agarose 添加到 100 毫升 E3 中，加热至完全溶解。当热，阿利奎特1毫升的LMP阿加罗斯成1.5毫升微胶管在37°C加热块。LMP 阿加罗斯将保持熔融在 37 °C。 在 37 °C 的每 1 毫升 LMP agaquot 中加入 40 微克 4 毫克/毫升 （25 倍），pH 7.0 三卡因 。 注意： 如果与色素菌株配合工作，在每 1 毫升别名中加入 20 μl 的 0.15% （50 倍） PTU。
   1. 在 4 °C 的密封 50 毫升管中存储剩余的 LMP agarose 几个月。
2. 麻醉寄生虫胚胎，通过添加1毫升4毫克/毫升（25倍），pH 7.0三卡因到25毫升的E3，胚胎已经在图像。
3. 轻轻旋转盘子，使胚胎在中间汇集。然后，使用宽尖塑料转移移液器，用尽可能少的液体提取胚胎。将移液器直立，轻轻弹跳胚胎，使胚胎沉淀到移液器的底部。
   1. 将胚胎放在移液器底部，通过轻轻触摸移液器尖端到浮子表面，将它们转移到1毫升的LMP agarose中。避免转移多余的液体，因为这将稀释糖。
4. 从移液器中排出多余的液体后，使用移液器轻轻混合浮子内的胚胎，然后使用移液器将所有糖和胚胎转移到玻璃底（1.....

Materials