眼球晶状体解剖：一种观察斑马鱼晶状体形态的技术

摘要

来源：Vorontsova I. 等，斑马鱼晶状体核定位与缝合完整性的评估。J. Vis. Exp. (2019)。

本视频介绍了一种用于解剖成年及幼年斑马鱼晶状体的实验方案，旨在分析晶状体皮质的形态特征及其缝合结构的完整性。

方案

1. 斑马鱼幼体及成体晶状体的解剖

1. 使用三卡因将6 dpf幼鱼至成年鱼麻醉至对触碰无反应，但仍保持强烈心跳。按照Schilling（2002）的方法测量鱼的标准体长以进行发育阶段判定。
2. 立即使用显微解剖剪剪下眼球，并将其放入盛有PBS的解剖皿中（图1展示成年鱼眼球）。
   1. 制作一个定制的35 mm培养皿，内填硅胶用于晶状体解剖。待硅胶凝固后，在其中挖出一个直径约2–3 mm、深度约0.5 mm的凹坑，用于在解剖过程中固定成年鱼眼球/晶状体。
3. 成年斑马鱼晶状体的解剖
   1. 将一个成年鱼眼球背面朝上置于盛有PBS的培养皿凹坑中。用镊子以<45°角从视盘插入以固定眼球，注意不要划伤或压迫晶状体。使用解剖剪从视盘向睫状区在视网膜和巩膜上做两到三个放射状切口。
   2. 像掀开花瓣一样将视网膜和巩膜剥离，并将眼球翻转，使角膜朝上。通过使用剪刀的平边操作巩膜和角膜间接固定晶状体，同时用镊子拉离视网膜及附着组织。小心修剪晶状体周围的多余组织。
      注意：必须仔细解剖，以获得始终健康的晶状体。
4. 幼年斑马鱼晶状体的解剖
   1. 将幼鱼眼球背面朝上放置于盛有PBS的硅胶培养皿平坦区域，使用 sharpened 钨针在用另一根钨针或镊子固定眼球的同时，对视网膜和巩膜进行放射状切割。
      注意：注意不要损伤晶状体。
      1. 通过将0.1 mm钨丝（长2 cm）的尖端浸入10%（w/v）NaOH溶液中并施加低电压交流电，电解法 sharpen 钨丝尖端14。使用本生灯加热熔化巴斯德吸管末端，将钨针固定于其中。
         注意：也可使用其他精细解剖工具。
         警告：NaOH具有腐蚀性。
   2. 用钨针的钝端轻轻将晶状体从解离的眼球中舀出，并小心拉去附着组织。

结果

图1：斑马鱼晶状体解剖。（A）从麻醉的鱼中解剖出眼睛，并将其置于后侧朝上。（B）用镊子通过视盘（od）固定眼睛，并从视盘向悬韧带方向在视网膜和巩膜上做两到三个放射状切口。（C）将切开的瓣向外折叠，暴露出晶状体。（D）旋转眼睛使其角膜朝上，通过角膜间接固定晶状体，并将巩膜-视网膜组织剥离。（E）修剪掉晶状体上残留的视网膜以及睫状区/悬韧带

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
磷酸盐缓冲液（PBS）	Fisher Scientific	BP399
玻璃底小室培养皿（35 mm 培养皿，14 mm 小室，#1.5 盖玻片）	MatTek Corporation	P35G-1.5-14-C
Dumont #5 镊子	Dumont & Fils		保持镊子锋利
万纳斯显微解剖剪	Ted Pella 公司	1346	尖锐/直尖头尖端
共聚焦显微镜	尼康		Eclipse Ti-E
氢氧化钠珠粒	Fisher Scientific	S612-3	警告——对眼睛和皮肤具有腐蚀性/刺激性，可损伤靶器官 - Journal of Visualized Experiments www.jove.com 版权所有 © 2019年《视觉化实验杂志》 第2页（共2页） 呼吸系统，对金属具有腐蚀性
一次性巴斯德玻璃吸管	Fisherbrand	13-678-20A