全细胞补丁夹钳电生理学：研究神经元电特性的方法

摘要

资料来源：罗伊、B等人 。 补丁夹记录从胚胎斑马鱼毛特纳细胞。 J. 维斯. 博览会.(2013).

该协议描述了一种称为全细胞补丁夹钳电生理学的技术，这是一种研究毛斯纳神经元和其他脊柱细胞在斑马鱼胚胎中的电特性的方法。

方案

1. 补丁夹子记录（整个单元格模式）

1. 所有录音均以整个单元块夹紧模式执行。录音室被放置在电生理学设置的显微镜阶段。我们的阶段是固定的，直立的贴片夹显微镜被螺栓固定在可移动显微镜平台或显微镜翻译器上。
2. 贴片夹移液器被拉到水平拉杆上（P-97;萨特仪器公司）从WPI获得的薄壁薄氧酸玻璃。在将火抛光到光滑的边缘后，Pipette 尖端直径为 0.2-0.4 μm，刀柄锥度为 4 mm。
3. 将移液器连接到电生理学设置中的放大器头级。重要的是保持头部阶段在大约45°角的水平轴，因为这确保了一个进入角度的移液器，适合形成高电阻密封到毛特纳细胞。
4. 在进入浴缸解决方案之前，对移液器施加少量正压，以减少弄脏尖端的机会。在记录 mEPSC 时，沐浴解决方案包括 1 μM TTX 来阻止行动潜力，5μM 链霉素来阻止甘氨酸受体和 10 μM 胆碱或 100 μM 皮罗毒素来阻止 GABAA 受体。在记录 mIPSC 时，沐浴解决方案包括 1μM TTX、金核酸以及双核素或链球菌素，具体取决于感兴趣的受体活性。
5. 使用移液器中的少量正压接近 M 细胞。正压轻轻地将细胞从一边推到另一边，当立即定位在细胞上时，在细胞膜上形成一个小酒窝。将移液器放置几秒钟，轻轻清洁细胞表面，以便在移液器和膜之间形成牢固的密封。释放移液器中的正压可启动密封，少量负压加上负移液器电位可在几秒钟内形成 GigaΩ 密封。
6. 将放大器上的保持电位更改为-60 mV。用一系列短脉冲的吸力破裂细胞膜。立即记录膜潜力，并最大限度地减少电容文物。补偿细胞电容 （Cm） 和访问 （系列） 电阻 （Ra） 70-85%。应定期监测 Ra，每 30 秒到 1 分钟一次，如果更改为 20% 或更多，则中止实验。
7. 一旦实验结束，并获得了足够的数据，准备被牺牲了，用一对钳子去除后脑。此时，数据分析可以开始。

材料