成年斑马鱼电生理学：一种体内测量神经元胞外电活动的方法

摘要

来源：Johnston, L.，等。完整成年斑马鱼脑内电生理记录。 J. Vis. Exp. (2013)

该方案描述了在成年斑马鱼中进行电生理学实验的操作步骤。该方法可用于测量神经活动。 体内.

方案

1. 电生理学

1. 关闭插管三通阀，并迅速断开连接插管基座与三卡因滴注装置的鲁尔 锁。
   1. 将完整的插管装置移至电生理显微镜下，并连接至灌流系统。
   2. 打开栖息水供应，以1 ml/min的速率灌流约1小时，以洗脱三卡因。
2. 在视觉控制下使用显微操作器，定位次级电极，使电极尖端可插入动物的鼻孔或上颌后方的凹陷处。
3. 将主电极针插入颅骨开窗部位。将针插入组织，使针尖位于视顶盖较浅的位置。
   1. 若电极插入过深，电信号可能较弱。
4. 采集并分析主电极与次级参考电极之间记录的电位差。此过程可用于获取细胞外记录信号。
   1. 以5 kHz的采样率、0.1 kHz的低通滤波器和1 Hz的高通滤波器，采用无间隙模式采集数据。
   2. 在栖息水灌流至少45分钟前，不得开始记录电生理活动。
   3. 在加入实验药物前，至少记录15分钟的基础神经活动。随后开始灌注所选实验药物，并按所需时长进行记录。在状态良好的样本中，可持续记录神经活动达2–3小时。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
生境水			pH 7.0–7.4，电导率为 400–450 μS；  由 Instant Ocean 和 碳酸氢钠维持
0.4% Tris 缓冲三卡因	Sigma-Aldrich	E10521	pH 7.2–7.4；-20 摄氏度保存
60 ml 鲁尔锁式注射器管	Becton, Dickinson and Company	309653
带鲁尔接头的三通旋塞阀
直径 0.010 英寸的银丝	A-M Systems, Inc.
Q 系列电极夹持器
Fisherbrand 100 mm × 15 mm 培养皿	Fisher Scientific	NC9299146
34 G 斜面针头	World Precision Instruments, Inc.	NF34BV
37 cm × 42 cm 吸水纸（Kimwip）	Kimberly-Clark Professional	TW31KEM
直径 1/8 英寸的管
直径 1 mm 的管
显微镜（Leica MZ APO）	可使用其他显微镜