体内电穿孔：一种用于斑马鱼定点转染的方法

摘要

来源：Durovic, T.，等。在成年斑马鱼端脑中通过电穿孔法实现质粒DNA的体内递送。J. Vis. Exp. (2019)。

本视频介绍 体内 电穿孔，一种将DNA递送至成年斑马鱼室管膜胶质细胞的技术。

方案

1. 电穿孔

1. 将鱼从注射装置中取出，同时仍用海绵固定住鱼体。
2. 将电极尖端内侧浸入超声耦合剂中。
3. 在鱼的端脑表面覆盖少量超声耦合剂。
4. 将鱼头置于两个电极之间，正极置于鱼头腹侧，负极置于背侧（图1C），同时仍用海绵固定鱼体。此电极布置方式可确保电流方向正确，从而对位于脑室下区的室管膜胶质细胞进行电穿孔。
5. 轻轻而准确地将电极压向端脑（图1 C），用脚踏开关施加电流，并保持电极位置直至完成全部五个脉冲。

结果

图1：斑马鱼端脑外翻冠状切面的示意图。（A）斑马鱼端脑冠状切面示意图，突出显示室管膜胶质细胞的位置，这些细胞排列在脑室表面，并构成腹侧脑室壁。背侧室管膜层连接两个半球，并覆盖位于室管膜胶质细胞层与室管膜细胞层之间的脑室（V）。（B）左侧为从上方拍摄的斑马鱼头部照片，以白色虚线标示端脑的位置。红色线条表示玻璃毛细管及其插入的目标位点。右侧为斑马鱼脑部示意图，以红色显示质粒注射的位置。需注意的是，玻璃毛细管并不接触端脑，质粒是注射到端脑上方的脑室内。T = 端脑，OT = 视顶盖。（C）左侧为斑马鱼头部照片（侧视图），右侧为头部示意图（侧视图），显示电极的位置，用于靶向端脑。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
超声耦合剂	SignaGel, Parker laboratories INC	15-60	电极凝胶
BTX 镊形电极	铂金镊形电极，BTX Harvard Apparatus	45-0486	直径 1 mm
电穿孔仪	BTX ECM830 方波电穿孔系统，BTX Harvard Apparatus	45-0662