腹腔内注射：将溶液输送到成年斑马鱼腹腔的方法

Abstract

资料来源：卢基宁等人。建模结核病在分枝杆菌马里纳姆感染成人斑马鱼。J. 维斯. 博览会.(2018).

此视频描述了一种腹腔内注射技术，一种将溶液输送到成年斑马鱼腹腔的方法。

Protocol

1. 实验 性M.马里纳姆 感染腹膜内注射

1. 将稀释细菌溶液的 5 μL 液滴放入一块护膜膜上，并将液滴拉入 30 G 胰岛素针中。
2. 使用5~8个月大的野生鱼和抹布1−/−hu1999突变鱼进行实验。在水箱水中用0.02%3氨基苯甲酸乙酯（pH 7.0）麻醉成年斑马鱼。将鱼的腹侧定位在湿润的发泡塑料上的缝隙中。
   注：拉格/变异鱼无法进行体细胞重组并产生功能T和B细胞。
3. 在骨盆鳍之间注射针头，角度约为45°。保持针头向上打开，观察整个开口位于腹腔内。慢慢注射细菌悬浮剂，小心地取出针头。
   注： 如果红色示踪剂在注射时从鱼中泄漏出来，则将鱼排除在实验之外。
4. 注射后立即将鱼转移到回收罐中，并加淡水。
5. 每 15 分钟从使用的细菌别名中采集 7H10 板上的细菌悬浮物样本，并在 29 °C 下孵育细菌 5 天，并通过计算板上的菌落来验证感染剂量。
6. 定期检查鱼的福祉，并安乐死任何有感染症状的鱼，其浓度超过0.02%的3氨基苯甲酸乙酯（pH 7.0）。
   注： 大约7%的成年斑马鱼感染了34±15CFU和30%的斑马鱼感染了2029±709 CFU将有8周的症状。症状可能包括游泳异常、对触摸缺乏反应、喘气、水肿或可观察到的浪费。
7. 按照通用标准维护斑马鱼。

Materials