腹腔注射：一种向成年斑马鱼腹腔内递送溶液的方法

摘要

来源：Luukinen, H.，等。利用分枝杆菌感染的成年斑马鱼建立结核病模型。 J. Vis. Exp. (2018)。

本视频介绍了一种腹腔注射技术，该方法用于将溶液注入成年斑马鱼的腹腔内。

方案

1.  通过腹腔注射进行M. marinum实验性感染

1. 将稀释后的细菌溶液用移液器吸取5 µL滴加到一片石蜡膜上，并用30 G胰岛素针头吸取液滴。
2. 实验使用5–8月龄的野生型斑马鱼和rag1−/−hu1999突变型斑马鱼。在养殖水体中加入0.02% 3-氨基苯甲酸乙酯（pH 7.0）对成年斑马鱼进行麻醉。将鱼腹面朝上固定在湿润的泡沫塑料切口内。
   注意： rag-/- 突变型斑马鱼无法进行体细胞重排，不能产生功能性T细胞和B细胞。
3. 将针头插入腹鳍之间的区域，角度约为45°。保持针头开口朝上，确保整个开口进入腹腔内。缓慢注入细菌悬液后，小心拔出针头。
   注意： 若注射时观察到红色示踪剂从鱼体泄漏，应将该鱼排除在实验之外。
4. 注射后立即把鱼转移到含有新鲜养殖水的恢复缸中。
5. 在实验过程中，每隔15分钟取用中的细菌分装液接种至7H10平板，于29 °C培养5天，通过计数平板上的菌落来确认感染剂量。
6. 定期检查斑马鱼的健康状况，对出现感染症状的个体使用浓度超过0.02%的3-氨基苯甲酸乙酯（pH 7.0）实施安乐死。
   注意： 大约7%接种了34 ± 15 CFU细菌的成年斑马鱼，以及30%接种了2029 ± 709 CFU细菌的斑马鱼，在8周内会出现症状。症状可能包括异常游动、对触碰无反应、喘息、水肿或明显消瘦。
7. 按照通用标准饲养和维护斑马鱼。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
海洋分枝杆菌	美国模式培养物集存库	ATCC 927
酚红	Sigma-Aldrich	P3532
磷酸盐缓冲液片剂（PBS）	Sigma-Aldrich	P4417-50TAB
Middlebrook 7H10 琼脂	BD，赛默飞世尔科技	11799042
3-氨基苯甲酸乙酯（pH 7.0）	Sigma-Aldrich	A5040
Omnican 100 30 G 胰岛素针头	Braun	9151133
1 mL 注射器	Henke Sass Wolf	4010.200V0