斑马鱼患者来源异种移植模型（zPDX）：一种癌症模型

摘要

来源：Wang L. 等.，利用斑马鱼幼虫作为宿主建立胰腺癌患者来源异质性移植瘤模型用于药物比较评估。J. Vis. Exp. (2019)。

本视频介绍了建立斑马鱼患者来源异种移植模型的技术。在示例方案中，我们评估了吉西他滨和Navitoclax药物对胰腺肿瘤异种移植模型的治疗效果。

方案

1. 将混合细胞悬液注射到斑马鱼体内

1. 将10倍浓度的三卡因溶液加入E3水中以麻醉斑马鱼幼鱼，并将幼鱼（来自步骤2.3）转移至盛有改良E3水（含1 g/L葡萄糖和5 mmol/L L-谷氨酰胺的E3水）的注射板中。
2. 将25 µL混合细胞悬液吸入微量毛细玻璃针中，并将针头插入显微注射操作仪。
3. 设定注射压力和时间，将50–80个细胞（约8 nL）注射至48 hpf斑马鱼的卵黄囊内。

2. 异种移植斑马鱼（zPDX 模型）的培养

1. 将移植异种移植物后的斑马鱼幼体转移至 40 mL 混合溶液（E3 溶液，含 1 g/L 葡萄糖和 5 mmol/L L-谷氨酰胺）中，置于 32 °C 条件下培养。

3. 药物在异种移植斑马鱼模型上的给药及肿瘤细胞/成纤维细胞活力评估

1. 确定吉西他滨/Navitoclax 的最佳浓度。
   1. 将10条野生型斑马鱼胚胎（48 hpf）放入12孔板的每个孔中。
   2. 在每个孔中加入不同浓度的吉西他滨或Navitoclax，并在32 °C下孵育两天。
   3. 两天后，计算斑马鱼幼鱼未出现明显畸形和异常行为时所能耐受的最大剂量（....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
L-谷氨酰胺	GIBCO	21051024
吉西他滨	Gemzan
甲基纤维素	Sigma	M0262
Navitoclax(ABT-263)	Selleck	S1001	Bcl-xL 抑制剂
仪器
显微注射仪	NARISHIGE
共聚焦显微镜	LEICA	SP8	0.00