心脏解剖：一种观察斑马鱼心脏发育的方法

摘要

来源：Singleman C. 等，斑马鱼（Danio rerio）幼虫、幼体及成体心脏解剖。J. Vis. Exp. (2011)。

本视频介绍了一种在多个发育阶段从斑马鱼中分离心脏以研究心脏发育、成熟和衰老的技术。

方案

1. 鱼类测量与解剖

1. 将单条鱼放入盛有半满新鲜 PBS 的培养皿中，并使其侧卧于右侧。
2. 使用数字游标卡尺测量鱼从吻端到尾部基部（尾柄处）的长度，不包括尾鳍（图1）。此为标准体长（SL）。
3. 可为每条鱼分配一个编号/字母组合，以便对个体鱼及其解剖后的心脏进行追踪，用于后续分析。包括亲本品系编号、固定时年龄、SL 测量值等数据均录入电子表格，并依据这些标签进行整理。
4. 在解剖前，用指定的追踪编号标记 PCR 管条，并加入 PBT 或适用于后续分析的其他溶液。
5. 将鱼腹面朝上置于培养皿中，用镊子夹住鱼头两眼之间至鳃部的位置以固定鱼体（图1）。

小型鱼类（标准体长小于12mm）：

6. a) 使用尖头镊子或固定在持针器上的微针，去除体壁的胸肌和鳍，以暴露心脏。解剖过程中镊子的持续移动可能在PBT中产生水流，导致鱼体移动。对于较小的鱼，这种情况尤为明显，因此可使用微针去除胸肌和鳍，并打开体腔。
7. a) 用镊子轻轻从心房下方将心脏从体腔中取出。或者，在某些鱼类中，可轻柔地牵拉动脉球，使其余心脏组织随之被完整取出。若采用此方法，需注意心房的位置，以免造成损伤。若取出时带有额外组织，属正常现象，可在后续步骤中清除。
8. a) 若鱼类携带荧光心肌标记物，例如 Tg(myl7:GFP)^twu34，可在解剖时使用荧光显微镜，并通过荧光信号确认心脏已被成功取出（图2）。
9. a) 心脏从体腔取出后，用镊子夹住心脏，再用微针去除心脏外部的非心肌组织和心外膜层。

较大的鱼类（标准体长大于12 mm）：

6. b) 使用弹簧手柄显微剪刀进行三次深度小于1 mm的切口：1- 横向切开鳃部；2- 横向切开腹部前端；3- 在腹侧做矢状切口，连接上述两个切口（图3）。
7. b) 使用尖头镊子从体壁上移除胸肌和鳍，以打开体腔并暴露心包的银白色组织（图4A）。去除该心包组织后，心脏将清晰可见（图4B）。
8. b) 使用显微剪刀剪断连接位于心脏上方的动脉球的动脉。一旦切断该动脉，将镊子尖端插入心房下方，用镊子将心脏从体腔中取出。若心脏附带少量其他组织，可暂保留，后续再行清除。
9. b) 心脏取出后，可用两把镊子夹持心脏并清除多余组织，或用一把镊子固定心脏，配合显微针去除额外的非心肌组织。若需去除心脏外表面的心外膜层，可轻柔刮除具有黑色色素的心外膜组织。

结果

图1. 用镊子夹住鱼的眼睛与鳃之间的部位。

图2. 此处所示的心脏特异性荧光转基因标记，如 Tg(myl7:GFP)^twu34，有助于观察从小型鱼类中解剖出的心脏。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
55号镊子  	精细科学工具公司	11295-51
显微剪刀 	精细科学工具公司	15005-08
持针器	精细科学工具公司	26016-12
显微针	精细科学工具公司	10130-10
培养皿  	BD生物科学公司	351029