斑马鱼心肌病模型：药物诱导的心脏毒性

摘要

来源：Ma X.，等。成年斑马鱼中阿霉素诱导的心肌病模型。J. Vis. Exp. (2018)。

本视频介绍了建立斑马鱼心肌病模型的技术，该方法可最大限度减少实验组之间及样本内部的变异。在本示例中，我们使用药物阿霉素建立斑马鱼心肌病模型。

方案

1. 成年鱼体内注射 DOX

1. 将一个内部放置海绵的洁净 100 mm 培养皿置于解剖显微镜下，调节焦距。将海绵切开，制作一个长约 4 cm 的腔隙以容纳一条鱼。对于体型较大的鱼，应制作更长的腔隙。
2. 准备一支带有 10 µL 微量注射器的 34 G 针头。用 1× HBSS 缓冲液冲洗针头，以清除注射器和管路中的气泡和堵塞物。
3. 将成年鱼置于含有 0.16 mg/mL 三卡因的胚胎水中麻醉 2 分钟。
   注意：麻醉时间超过 5 分钟后进行 DOX 注射，容易导致鱼类死亡。
4. 用含三卡因的胚胎水浸湿海绵，并将鱼转移至海绵上以进行注射。
5. 通过以下两种方法之一进行腹腔内 DOX 注射。
   1. 传统腹腔注射
      1. 将鱼腹部朝上放置于海绵的腔隙中。迅速将针头以与鱼体呈 45° 角插入腹鳍之间的中线位置，刺入深度约为 1–2 mm。缓慢推注全部 DOX 溶液。拔出针头前等待 5 秒。通过观察鱼腹部是否出现可见的红色来确认 DOX 是否成功递送。
   2. 替代性腹腔注射
      1. 将鱼侧向放置于海绵上，头部朝右。用左手持钝头镊子轻轻固定鱼体，右手持微量注射器。
      2. 将针头置于腹鳍上方的侧线以下，针尖斜面朝上。以 45° 角指向 7 点钟方向，将针头插入鱼体位于腹鳍与肛门之间的体腔，深度为 3–4 mm，然后缓慢推动推杆。通过观察鱼腹部是否出现可见的红色来确认 DOX 是否成功递送。
6. 迅速将注射后的鱼转移到装有新鲜系统水的洁净交配缸中，使其恢复。每次注射之间用 1× HBSS 缓冲液冲洗针头一次。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
交配缸	Aquaneering	ZHCT100	鱼类繁殖
盐酸多柔比星	Sigma	D1515-10MG
Hank's 平衡盐溶液（HBBS）	ThermoFisher	14025076	DOX 的溶剂
100 mm 培养皿	Falcon	431741
10 μL NanoFil 微量注射器	WPI	NANOFIL	用于注射
34 号针头	WPI	NF34BV-2	用于注射
三卡因	Argent		鱼类麻醉