zPDX 侵袭性分析:研究斑马鱼胚胎异种移植物中转移癌细胞的侵袭行为

1. 成像和分析转移过程

1. 用宽头巴斯德移液管收集几个麻醉的胚胎，并将它们转移到聚苯乙烯培养皿的玻璃底部。
2. 去除多余的水，保留少量的鸡蛋水。用发环工具将胚胎纵到位，并在玻璃顶部盖上盖子。
3. 将倒置共聚焦显微镜与水浸或远距离干式物镜结合使用。放置胚胎，使感兴趣的区域尽可能接近目标。
4. 麻醉后立即进行成像，以降低因液体蒸发而死亡的风险。
   1. 通过合并两个成像通道，从胚胎上相同位置的 EGFP 标记的脉管系统和 mCherry 标记的肿瘤细胞捕获信号，以将注射的细胞与血管共配准。
   2. 对于每个斑马鱼胚胎，从头部区域和尾部区域收集两组不同的图像。
5. 量化播散细胞的数量。
   1. 对于卵黄周围间隙注射，计算每条鱼中从细胞团扩散到头部和尾部区域内的胚胎鱼体的细胞数 4,15;这些区域在正面超出心腔边界，在鱼鳔背侧的顶部，在尾部超出泌尿生殖道开口。
   2. 对于 Doc 注射，计算从循环中侵入尾鳍胶原纤维的单个细胞的数量 （MDA-MB-231） 或由细胞集体形成的簇的数量 （M2） 在每条斑马鱼的尾部造血组织 （CHT） 中19。
6. 使用共聚焦显微镜更详细地研究侵袭和转移（强烈推荐）。
   1. 使用低放大倍率（4 倍物镜）对全身成像并获得肿瘤细胞播散模式的概览。
      注:更高的放大倍率（20X 和 40X 物镜）适用于研究肿瘤内和肿瘤周围血管生成以及胚胎体内播散细胞的精确定位。
   2. 使用 488 nm 激光扫描斑马鱼胚胎脉管系统，使用 543 nm 激光扫描用红色荧光标记的植入肿瘤细胞。通过分 8 到 10 个步骤扫描每个胚胎来获得高质量的图像。扫描并平均每个步骤六次。
7. 如果需要进一步实验，请小心地将胚胎放回鸡蛋水中。