zPDX-侵袭性分析：利用斑马鱼胚胎异种移植模型研究转移性癌细胞的侵袭行为

摘要

来源：Ren, J. 等. 人乳腺癌细胞在斑马鱼胚胎中的侵袭行为。J. Vis. Exp. (2017)。

本视频介绍了一种将乳腺癌细胞显微注射到转基因斑马鱼胚胎卵周隙的方法。孵育后，我们在荧光显微镜下观察胚胎，以监测癌细胞的侵袭、播散和转移过程。

方案

1. 成像与分析转移过程

1. 用宽口巴斯德移液管收集多个已麻醉的胚胎，并转移至聚苯乙烯培养皿的玻璃底端。
2. 去除多余水分，保留少量卵水。使用毛发环工具将胚胎调整至合适位置，并在玻璃上加盖盖玻片。
3. 使用倒置共聚焦显微镜，结合水浸物镜或长距离干物镜。调整胚胎位置，使目标区域尽可能靠近物镜。
4. 麻醉后立即进行成像，以降低因液体蒸发导致的死亡风险。
   1. 在胚胎的同一位置同时采集EGFP标记的脉管系统和mCherry标记的肿瘤细胞信号，通过合并两个成像通道实现注射细胞与血管的共定位。
   2. 对每条斑马鱼胚胎，分别从头部区域和尾部区域采集两组不同的图像。
5. 定量分析播散细胞的数量。
   1. 对于卵周隙注射，计数每条鱼中从细胞团扩散至胚胎鱼体头部和尾部区域的细胞数量4,15；这些区域位于心腔前缘前方、鳔背侧上方以及泄殖腔开口后方。
   2. 对于 Doc 注射，计数从循环中侵入尾鳍胶原纤维的单个细胞数量（MDA-MB-231），或计数在每条斑马鱼尾部造血组织（CHT）中细胞集体形成的簇数（M2）19。
6. 通过使用共聚焦显微镜（强烈推荐）更详细地研究侵袭和转移。
   1. 使用低倍镜（4X 物镜）对整个机体进行成像，以获取肿瘤细胞扩散模式的总体分布情况。
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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
宽头巴斯德吸管 (0.5-20 µL)	Eppendorf	F276456I
共聚焦显微镜	Leica	SP5 STED
体视显微镜	Leica	MZ16FA
Tg (fli:EGFP) 斑马鱼品系			由荷兰莱顿大学生物研究所 Ewa Snaar-Jagalska 博士惠赠
底部为玻璃的聚苯乙烯培养皿	WillCo	GWST-5040
荧光体视显微镜	Leica	M165 FC
三卡因（3-氨基苯甲酸）	SigmaAldrich	A-5040