兔乳腺导管内注射：将目标溶液定位于兔乳腺组织的局部递送方法

摘要

来源：Clark 等.，乳腺导管内递送至兔乳腺组织。J. Vis. Exp. (2017)。

在本视频中，我们介绍了一种将待研究溶液注入兔乳腺导管的技术，并通过高分辨率超声成像观察对比剂分布，以确认给药效果。

方案

1. 术前准备

1. 记录每只兔子的体重。与所有临床前研究一样，应定期监测动物体重，以评估潜在的毒性反应。
2. 在对兔子进行麻醉前，将市售超声耦合剂装入50 mL锥形管中，于500 × g离心30秒；离心结束后，凝胶中应无可见气泡。
3. 皮下注射格隆溴铵，剂量为0.1 mg/kg，同时肌肉注射乙酰丙嗪，剂量为0.75 mg/kg。给药后等待15–20分钟，待镇静作用起效，期间持续监测生命体征和行为表现。
   注意：格隆溴铵是一种抗胆碱能药物，可预防心动过缓，并减少呼吸道和胃肠道分泌物。乙酰丙嗪是一种镇静剂，用作麻醉前的预处理药物。
4. 皮下注射氯胺酮（35 mg/kg）和赛拉嗪（5 mg/kg）作为麻醉剂。然而，随着操作者经验的积累，若能更快完成导管内给药，可将药物剂量减少至氯胺酮15 mg/kg和赛拉嗪3 mg/kg（均为皮下注射）；这将缩短麻醉时间以及动物从麻醉中恢复所需的时间。
5. 每15分钟检查并记录一次心率、SPO_2, 、体温、呼吸频率及黏膜颜色。双眼均应涂抹眼用润滑剂。
   注意：麻醉的给药与监测必须由经过适当培训并获得所在机构IACUC批准的人员执行。使用兽用麻醉监护仪有助于获取生命体征数据，建议使用。但兽用麻醉监护仪不能替代每15分钟对动物进行一次手动检查。请参阅制造商说明书以正确使用兽用监护仪。
6. 通过轻捏脚趾确认麻醉是否起效；在继续操作前，兔子应无反应。
7. 小心剃除兔子后腹部第三和第四对腹股沟乳头周围区域的毛发。
8. 在大部分毛发去除后，将市售脱毛膏涂抹于已剃除毛发的区域。涂抹10分钟后，用浸有温水的湿纸巾擦去脱毛膏。
   注意：兔子皮肤非常脆弱且敏感。脱毛膏使用时间不应超过10分钟。实际上，更安全的做法是在5分钟时进行“小范围测试”，仅当测试区域显示需要更长时间时，才延长使用时间。
9. 使用浸有酒精的纱布垫擦拭该区域，以清洁注射部位。
10. 将兔子仰卧置于一个V形槽内，槽内铺设循环温水毯和吸水垫。

2. 对比剂的制备

1. 根据制造商说明书重悬非靶向对比试剂。轻轻吹打混匀。
   注意：本方案中使用的对比剂在重悬后于室温下可稳定保存 4 - 6 小时。每次取用时应轻轻摇动小瓶。
   注意：所需溶液体积取决于拟注射的导管数量。每乳头有 4 个导管开口，0.2 mL 溶液足以灌注一只成年新西兰白兔（Oryctolaguscuniculus）单侧乳腺的一个导管系统。因此，单侧乳腺总注射量可达 0.8 mL。

3. 导管内递送

1. 找到需要注射的相应乳头；第3个^rd 和 4^th 建议选用腹股沟乳头对，因为当动物仰卧时，这些乳头易于观察。
2. 将0.2 mL无菌0.9%生理盐水加入1 mL鲁尔锁结核菌素注射器中，并安装22 G针头。生理盐水吸入注射器后，妥善处理22 G针头，并更换为无菌25 G针头。用浸有85%异丙醇的纱布轻轻擦拭注射部位。
3. 针尖斜面朝上，注射器与动物体平行，将针尖斜面插入乳头侧面，缓慢注入0.1–0.2 mL生理盐水；这有助于更清晰地观察导管开口。
4. 将0.2 mL注射液装入1 mL鲁尔锁型结核菌素注射器中。
5. 用拇指和食指轻轻握住乳头，并略微提起，以便进行导管内注射；佩戴式眼部放大镜有助于观察导管开口。
6. 在保持乳头抬高位置的同时，使用25 G钝头针小心地插入目标导管。
7. 插管后，轻轻旋转鲁尔锁注射器，将其连接到钝头灌注针的接头上，直至锁定到位。
8. 抬起乳头，缓慢注入溶液，以尽量减少因导管内液体快速流动可能造成的损伤；注射过程中任何时候均不应遇到阻力。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
MicroMarker 非靶向对比试剂	VisualSonics	VS-11694
鲁尔锁1 mL注射器	BD	309628
格隆溴铵 0.2 mg/mL	Wedgewood Compounding Pharmacy	GLYCOP-INJ013VC	保质期6个月，供应可能有限。
盐酸氯胺酮 100 mg/mL	Animal Health International	21250699	http:// www.animalhealthinternational.com/
乙酰丙嗪 10 mg/mL	Animal Health International	17640541
赛拉嗪 20 mg/mL	Animal Health International	20101547
脱毛膏	Veet		适用于敏感肌肤，可通过本地零售商购买。
钝头输注针	Sai Infusion Technology	B14-50	http://www.sai-infusion.com/ collections/blunt-needles
兽用脉搏血氧仪	EdanUSA	VE-H100B	http://www.edanusa.com/Product/ VE-H100B-Veterinary-PulseOximeter.html
温水循环泵	Gaymar	TP700
温水毯	Animal Health International	21232696	Maxi-Therm Lite 加热垫