福尔马林固定石蜡包埋肿瘤样本的制备:保存非小细胞肺癌 （NSCLC） 组织和细胞学样本的方案

摘要

来源:Ilié， M. 等人。使用 22C3 抗 PD-L1 抗体浓缩物检测非小细胞肺癌患者的活检和细胞学样本。J. Vis. Exp.（2018 年）。

该方案描述了福尔马林固定石蜡包埋肿瘤样本的制备，这些样本用于保存非小细胞肺癌 （NSCLC） 的组织和细胞学样本

方案

1. 肿瘤组织样本的制备

1. 将肿瘤组织固定在盒中的10%中性缓冲福尔马林（NBF）中。
   注意:来自近端肺肿瘤的肿瘤组织通常通过支气管镜检查获得，由肺科医生或肺专家在中度镇静下进行。对于外周病变和弥漫性肺疾病，需要经支气管或穿刺活检。这些手术通常在手术室或重症监护室进行。
2. 将包埋盒嵌入石蜡中。
   注意:解剖后立即通过灌注或浸泡实现固定，通常需要 8-10 小时。固定剂体积应比标本体积高 15-20 倍。不建议固定活检组织超过 10 小时，因为过度固定会导致抗原掩盖。室温下固定速度约为 1 mm/h。
在
3. 组织脱水机中用蜡浸润固定的组织样品（参见材料表）。
   注意:在三个酒精浴中进行脱水，浓度增加 70%、85% 和 90%。最后通过三个最后的无水酒精浴去除水。在三个甲苯浴中进行透明化，并在热蜡浴 （44–60 °C） 中进行蜡浸润。
4. 将组织嵌入装满熔融石蜡的模具中（参见材料表）并等待凝固。
5. 在切片机上以 3 μm 的厚度将石蜡包埋的组织切片。
6. 将石蜡带转移到带正电荷的显微镜载玻片上（参见材料表）。
7. 将载玻片在 37 °C 下干燥 1 小时><。 注意:将组织切片储存在 2-8 °C（首选）或室温下至 25 °C 以保持抗原性，并在切片后 15 天内染色。

2. 细胞学样本的制备

1. 在保存溶液中收集支气管冲洗液（见材料表）。
   注意:为此，使用标准的支气管镜检查技术。
   1. 灌洗要采样的支气管的分布。将洗涤液收集在干净的容器中。在容器上标记患者的名字和姓氏、出生日期和样本来源。
2. 将支气管冲洗液转移到 50 mL 锥形管中，加入 2 g DL-二硫苏糖醇粉末（参见材料表），涡旋试管 30 分钟，然后在室温下以 250 x g 离心 5 分钟。
3. 去除上清液并加入 10 mL 粘液溶解溶液（参见材料表）。
4. 以中速（9 级）摇动样品 20 分钟，并在室温下以 250 x g 离心 5 分钟。
5. 去除上清液，将细胞沉淀物沉积在含有 10% NBF 的收集管中。
6. 向细胞沉淀中加入 4 滴细胞块制备试剂（参见材料表）。
7. 将细胞沉淀转移到盒中，将其固定在 10% NBF 中，并将其石蜡包埋用于细胞块制备和切片（参见步骤 1.1-1.7）。

材料