福尔马林固定石蜡包埋肿瘤样本的制备：一种用于保存非小细胞肺癌（NSCLC）组织与细胞学样本的方案

本文内容

摘要

本方案描述了用于保存非小细胞肺癌（NSCLC）组织和细胞学样本的福尔马林固定石蜡包埋肿瘤样本的制备方法

方案

1. 肿瘤组织样本的制备

将肿瘤组织置于包埋盒中的10%中性缓冲福尔马林（NBF）中固定。
注意： 近端肺部肿瘤的组织通常由肺科医生或肺部专科医生在中度镇静下通过支气管镜检查获取。对于外周病灶和弥漫性肺部疾病，应进行经支气管或穿刺活检。这些操作通常在手术室或重症监护室中进行。
将包埋盒中的组织进行石蜡包埋。
注意： 固定可在解剖后立即通过灌注或浸入法完成，通常需要8–10小时。固定液体积应为标本体积的15–20倍。不建议将活检组织固定超过10小时，因为过度固定可能导致抗原掩蔽。在室温下，固定速度约为1 mm/h。
使用组织处理机（见材料表）对固定后的组织样本进行石蜡浸润。
注意： 脱水过程依次在浓度递增的三种酒精浴中进行：70%、85%和90%。最后通过三次无水酒精浴彻底去除水分。透明步骤在三道甲苯浴中完成，石蜡浸润则在热石蜡浴（44–60 °C）中进行。
将组织置于装有熔化石蜡的模具中，并等待其凝固。
使用切片机将石蜡包埋的组织切成3 μm厚度的切片。
将石蜡带转移至带正电荷的显微镜玻片上（见材料表）。
在37 °C下干燥玻片1小时。
注意：为保持抗原性，组织切片应储存于2–8 °C（优先）或室温不超过25 °C的环境中，并在切片后15天内完成染色。

2. 细胞学样本的制备

在保存液中收集支气管灌洗液（参见材料表）。
注意：此步骤采用标准支气管镜检查技术。
1. 灌洗待取样的支气管区域，将灌洗液收集至洁净容器中。用患者的姓名、出生日期和标本来源标记容器。
将支气管灌洗液转移至50 mL锥形管中，加入2 g DL-二硫苏糖醇粉末（参见材料表），涡旋振荡30分钟，然后在室温下以250 × g 离心5分钟。
弃去上清液，加入10 mL黏液溶解液（参见材料表）。
以中等速度（9级）振荡样品20分钟，并在室温下以250 × g 离心5分钟。
弃去上清液，将细胞沉淀物转移至含有10%中性缓冲福尔马林（NBF）的收集管中。
向细胞沉淀物中加入4滴细胞块制备试剂（参见材料表）。
将细胞沉淀物转移至包埋盒中，用10% NBF固定，随后进行石蜡包埋，用于细胞块制备与切片（参见步骤1.1–1.7）。

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材料

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