来源：Lee, J. Y 等，利用球状体、克隆形成实验和斑马鱼异种移植模型对抗癌香豆素OT48的生物活性进行临床前评估。J. Vis. Exp. (2018)
本视频介绍了利用斑马鱼异种移植模型评估体内肿瘤形成并研究治疗药物作用的方法。
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方法文章
斑马鱼异种移植实验：一种评估治疗药物在斑马鱼体内对肿瘤发生抑制效果的方法
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2023年4月30日
本文内容
摘要
方案
所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。
1. 斑马鱼异种移植实验
注意：该技术方法以示意图形式展示（图1）。
- 储备试剂的配制
- 配制1 L 30倍浓度Danieau溶液：1740 mM NaCl，21 mM KCl，12 mM MgSO₄4•7H₂O，18 mM Ca(NO₃)₂3)2，以及150 mM HEPES。使用pH计将缓冲液的pH值调节至7.6。
- 配制1%（50倍）三卡因溶液：将20 mg氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐（tricaine）溶于2 mL蒸馏水中。
- 配制1%酚红-PBS溶液：加入2 µ酚红钠盐溶液 L 加至 198 µ1.5 mL 灭菌 PBS 溶液 µL型管
- 制备3%甲基纤维素：将3 g甲基纤维素加入100 mL 1× Danieau溶液中。
- 斑马鱼卵的采集与孵化
- 将一条雌性斑马鱼和一条雄性斑马鱼分开放置在装有经紫外线灭菌和过滤的自....
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结果
图1：斑马鱼异种移植实验整体流程的示意图。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| A549 | ATCC | CCL-185 | 37 C° |
| RPMI 1640 | Lonza | 30096 | 4 C° |
| FBS | Biowest | S1520-500 | -20 C° |
| 青霉素-链霉素 | Lonza | 17-602E | -20 C° |
| 细胞培养瓶 T25 | SPL | 70025 | 室温 |
| 细胞培养瓶 T75 | SPL | 70075 | 室温 |
| 细胞培养瓶 T175 | SPL | 71175 | 室温 |
| 1.5 ml 离心管 | Extragene | Tube-170-C | 室温 |
| 24 孔板 | SPL | 30024 | 室温 |
| 培养皿 | SPL | 10100 | 室温 |
| PBS 溶液 | Hyclone | SH30256.02 | 室温 |
| 胰蛋白酶-EDTA | Gibco | 25-300-054 | 4 C° |
| 氯化钠 | Sigma-Aldrich | 71382 | 室温 |
| 氯化钾 (KCl) | Sigma-Aldrich | P9541 | 室温 |
| 七水合硫酸镁 (MgSO4·7H2O) | Sigma-Aldrich | M2773 | 室温 |
| 四水合硝酸钙 (Ca(NO3)2·4H2O) | Sigma-Aldrich | C1396 | 室温 |
| HEPES 溶液 | Sigma-Aldrich | H0887 | 室温 |
| 甲磺酸艾莫宁 (Tricaine) | Sigma-Aldrich | E10521 | 室温 |
| 酚红溶液 | Sigma-Aldrich | P0290 | 室温 |
| 甲基纤维素 | Sigma-Aldrich | M0512 | 室温 |
| 1-苯基-2-硫脲 (PTU) | Sigma-Aldrich | P7629 | 室温 |
| CM-Dil 荧光染料 | Invitrogen | C7001 | -20 C° |
| 玻璃毛细管 | World Precision Instruments | TW 100F-4 | 室温 |
| 微电极拉制仪 | Shutter instrument, USA | P-97 | 室温 |
| 显微注射仪 | World Precision Instruments | PV820 | 室温 |
| 注射器 | KOVAX | 1ml | 室温 |
| 微量移液器吸头 | Eppendorf | 5242956003 | 室温 |
| 载玻片 | Marienfeld | HSU-1000612 | 室温 |
| 荧光显微镜 | Leica | DE/DM 5000B | 室温 |
