白血病亚群收获:一种从 2D 共培养中空间分离白血病细胞亚群的方法

Abstract

来源:Slone， WL 等人 体外模拟化疗耐药性白血病。J. Vis. Exp. （2016）。

该视频描述了三种白血病细胞亚群的空间分离方法:悬浮的白血病细胞自由漂浮在培养基中，粘附在间充质基质细胞单层表面的相亮白血病细胞，以及从 2D 共培养中迁移到间充质基质细胞单层下的阶段暗淡白血病细胞。

Protocol

1. 在共培养中分离 3 个亚群

1. 悬浮 （S） 肿瘤亚群的集合。
   1. 用移液管从共培养板中吸出培养基，然后轻轻地重新应用相同的培养基以冲洗板，并在 15 ml 锥形管中收集含有白血病细胞的培养基。收集的白血病细胞是 S 亚群。
2. Phase Bright （PB） 肿瘤亚群的集合。
   1. 将 10 ml 新鲜培养基放回共培养板上。通过上下移液添加的培养基约 5 次来剧烈冲洗，以去除贴壁的白血病细胞，但不要足够用力以去除贴壁的 BMSC/OB 成分。
   2. 用移液管吸出并将培养基收集在 15 ml 锥形管中。收集的细胞是 PB 亚群。
3. Phase Dim （PD） 肿瘤亚群的集合。
   1. 用 1 ml PBS 冲洗板以去除剩余的培养基。用胰蛋白酶消化共培养板，并置于 37 °C 培养箱中 5 分钟。
   2. 从培养箱中取出板，轻轻敲击板的侧面以去除粘附的 BMSC/OB。
   3. 加入 1 ml 胎牛血清 （FBS） 并上下移液 3-5 次以分离大细胞聚集体。
   4. 在 15 ml 锥形管中收集带有细胞的培养基。这些细胞也是具有 BMSC/OB 的未纯化 PD 亚群。
4. 以 400 x g 离心 3 个分离的亚群 7 分钟。吸出并弃去上清液，然后将沉淀分别重....

Materials