基于 G-10 柱的白血病细胞分选:一种从骨髓基质细胞中纯化急性淋巴细胞白血病细胞的方法

Abstract

来源:Slone， WL 等人 体外模拟化疗耐药白血病 J. Vis. Exp. （2016）。

该视频介绍了使用凝胶型 10 交联葡聚糖 G-10 柱从骨髓基质细胞中分离急性淋巴细胞白血病细胞。这种方法有助于恢复已迁移到贴壁骨髓基质细胞下的肿瘤细胞群，从而产生"期暗淡"肿瘤细胞群。

Protocol

1. 将共培养细胞上样到 G10 色谱柱上

注意:在将包含细胞的培养基添加到 G10 列之前，请确保旋塞阀完全关闭。此外，每个亚群必须在单独的 G10 列上运行，以免在下游分析中在群体之间引入任何偏差。

1. 使用 1,000 μl 移液器，将预热培养基中的每个细胞亚群 1 ml 逐滴添加到单独的 G10 列中。确保包含细胞的培养基保持在 G10 沉淀的顶部或内部。让细胞在 G10 沉淀上以 RT.
   孵育 20 分钟 注意: 旋塞阀在孵育期间保持关闭。

2. 从 G10 色谱柱收集白血病细胞

1. 向每个 G10 柱中加入 1-3 ml 预热的培养基。打开旋塞阀，让填料缓慢滴加流出色谱柱。
   注意:保持色谱柱的缓慢流速至关重要，否则含有 BMSC/OB 的 G10 沉淀会从色谱柱中冲出并污染分离的白血病细胞。
2. 继续以小增量 （1-2 ml） 向 G10 柱中加入预热的培养基，直到总共 15 至 20 ml 流过柱并收集完毕。关闭旋塞阀和盖收集管。
   注意:如果在收集管底部看到 G10 颗粒沉淀，请轻轻地从收集管中取出培养基，使 G10 颗粒沉淀不受干扰，然后转移到新管中。
3. 在 RT 下以 400 x g 离心收集的培养基 7 分钟。去除上清液并将细胞沉淀重悬于适合下游应用的缓冲液中。
4. 细胞现在是无 BMSC 或 OB 污染的纯白血病细胞群，可由用户自行决定用于下游应用。
   注:当细胞通过 G10 柱时，白血病细胞活力应保持不变。

Materials