从小鼠后肢采集骨髓

摘要

来源：Zhu, Y. P., Padgett, 等。中性粒细胞谱系细胞的质谱流式分析用全骨髓制备。J. Vis. Exp. (2019)。

本视频介绍了一种详细的实验方案，用于从小鼠后肢分离新鲜的完整骨髓，以研究白血病等血液疾病患者的全骨髓缺陷。

方案

1. 收集小鼠骨髓（BM）

1. 从商业供应商处购买 C57BL/6J 小鼠。给予标准啮齿类动物饲料，并将小鼠饲养于无病原体设施中的微隔离笼内。
2. 实验使用 6–10 周龄的雄性小鼠。通过吸入 CO₂ 实施安乐死，随后进行颈椎脱位。
3. 将小鼠仰卧置于无菌手术垫上。用 70% 乙醇喷洒腹部及后肢区域以消毒皮肤。使用解剖手术剪剪开腹腔。
4. 去除皮肤以暴露后肢。使用一对钝头敷料镊夹住小鼠胫骨踝关节正上方位置。使用另一对弯头敷料镊固定钝头敷料镊下方的胫骨。用钝头敷料镊撕开附着的肌肉，折断胫骨并暴露骨组织。
   注意： 胫骨与膝关节连接较松，可用钝头敷料镊轻易取出。
5. 将胫骨放入冷的 1× PBS 中。
6. 随后，将固定用的弯头敷料镊向下移动至股骨。将钝头敷料镊滑至膝关节下方并夹住髌骨。轻柔向上牵拉以脱位髌骨。撕开附着于髌骨的肌肉以暴露股骨。用弯头敷料镊夹住暴露的股骨，并使用解剖手术剪从骨底部剪下股骨。
7. 将股骨放入冷的 1× PBS 中。
8. 用 18 G 针头在 0.5 mL 微离心管上打孔。
9. 将胫骨和股骨均放入同一支 0.5 mL 微离心管中，使骨的开口端朝下对准孔洞。
10. 将装有胫骨和股骨的 0.5 mL 管放入一支 1.7 mL 微离心管中。
11. 在微量离心机中以 5,510 x g 离心 30 秒，使双层管中的胫骨和股骨共同离心。
12. 确保骨髓（BM）已从骨组织中被完全冲出，并在管底形成沉淀。弃去含有空骨的 0.5 mL 管。小鼠骨髓现已准备好用于后续步骤。

材料