骨髓穿刺：一种用于获取骨髓以检查细胞形态学的方法

来源：Cloos, J. 等。急性髓系白血病中可测量残留病及白血病干细胞的骨髓采样与处理综合方案。J. Vis. Exp. (2018)。

本视频介绍了从髂嵴抽取骨髓以及制备涂片进行活检的技术。在示例中，我们对一名急性髓系白血病（AML）患者进行骨髓穿刺抽吸，并检查细胞以检测可测量残留病（MRD），后者是一种重要的预后生物标志物。

所有涉及人类参与者的操作均按照机构、国家和国际的人类福利指南进行，并已通过当地机构审查委员会的审查。

1. 骨髓穿刺与样本制备

患者与材料准备
1. 使用16号针头将1%利多卡因注入一个或两个10 mL注射器中，然后更换为21号针头。
2. 在表面皿上滴加两滴5% EDTA。
3. 准备载玻片（n=15，编号与患者编号及日期保持一致），用于涂片制备。
4. 将患者置于侧卧位，定位髂后上棘，并用笔做标记。
  注意： 通常情况下，髂后上棘位于髂嵴远端约一手宽、中线外侧约一手宽处。在女性中，该骨性标志可能略偏外侧，而在部分男性中可能略偏内侧。
5. 用含0.5-1%氯己定的乙醇溶液以目标活检区域为中心向外环形消毒皮肤。
6. 打开无菌手套包装，戴上无菌手套，并将包装纸平铺于桌面以建立无菌区域。打开穿刺针包装，并将其放置于无菌区域内。
7. 浸润皮肤、皮下组织，最终至骨膜。在骨膜处注射利多卡因，确保直径约1 cm的区域被充分麻醉。
  注意： 对骨膜充分注射利多卡因是保障患者舒适度的最重要因素之一。可通过穿刺针轻敲目标活检部位并询问患者是否感到疼痛，来测试骨膜是否已充分麻醉。需注意：儿童在整个操作过程中均接受全身麻醉。
8. 用手掌和食指握住穿刺针（15 Ga × 2.8"），食指置于针体金属杆侧面靠近针尖处；此握持方式可提供更好的控制力。
9. 通过旋转动作（快速交替进行旋前/旋后运动）将针穿过皮肤，朝向髂棘推进，并使针尖接触髂后上棘。
10. 确保针进入已麻醉的骨膜区域；此时患者应仅感受到压力而无疼痛感。若患者感到疼痛，应重新调整针的位置或追加利多卡因注射。
11. 施加轻柔但坚定的压力，同时以顺时针-逆时针交替旋转的方式推进穿刺针。通常当阻力减小时，提示针已进入骨髓腔。
12. 从针中取出针芯，将一个10 mL空注射器连接至穿刺针上。
13. 通过轻柔回拉注射器活塞产生负压。提前告知患者在抽取骨髓时可能会感到抽筋样感觉或疼痛。若未获得足够的骨髓小粒，可再进行一次快速抽吸。大多数骨髓小粒存在于首次回抽所得的前1-2 mL样本中。仅抽取1-2 mL，以避免样本稀释。
  注意： 样本稀释会导致血液稀释，可能干扰微小残留病（MRD）检测结果。
14. 取下注射器，重新插入针芯。将部分骨髓排入表面皿，其余部分排入一支8 mL肝素抗凝管中。
  注意： 每当骨髓样本进入标本管后，应立即轻轻颠倒混匀，以确保充分抗凝。骨髓凝固常是导致样本不合格的原因。可从同一穿刺点再次抽取额外骨髓，但更推荐在原位置前进5-10 mm后再进行新的抽吸。建议每次穿刺深度最多不超过两次抽吸。务必对采集管按顺序编号，以标识第一次、第二次或后续抽吸所得样本。通常惯例是将首次抽吸样本用于最重要的诊断分析。
15. 或者，可将针从原穿刺点退出，再于原穿刺点数毫米外重新进入骨髓腔，并重复操作。
  注意： 每次抽吸量不应超过1-2 mL，以避免显著的血液污染。
16. 根据所需材料量重复操作。当已获取满足特定临床研究方案所需的足够材料后，拔出骨髓穿刺针。
  注意： 若骨髓抽吸缓慢或困难，使用预先用抗凝剂冲洗过的注射器可能有所帮助。若出现“干抽”（dry tap），应进行骨髓活检（trephine biopsy），此操作不在本文范围之内。

2. 形态学检查涂片的制备

为获得最佳的形态学评估效果，从表面皿中的穿刺物中挑取骨髓小粒（例如使用塑料刮刀），并将其置于载玻片上。
将另一张载玻片轻轻覆盖在含有骨髓的载玻片上，轻轻滑动；避免施加任何压力。
注意：仅在骨髓小粒非常大的情况下，可施加轻微压力，以减少细胞涂片的厚度。此操作过程中若有助手协助处理标本管将更为便利。准确标记标本管上的患者编号及连续骨髓穿刺的序号至关重要。
将涂片彻底干燥后，进行瑞氏-吉姆萨-格朗沃尔特染色（见材料表）。在光学显微镜下观察细胞形态（见图1）。
注意：图1A 显示的是由多种功能细胞类型组成的正常骨髓涂片，而 图1B 为急性髓系白血病（AML）患者的涂片，主要为白血病原始细胞。为了更准确地界定残留白血病负荷，需进行免疫表型分析。

骨髓穿刺：一种用于获取骨髓以检查细胞形态学的方法

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摘要

方案

结果

材料

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